La isoforma a de galectina-8 (Gal-8a) promueve la migración de células tumorales mamarias

NUGNES, LORENA; CÁRDENAS DELGADO, VICTOR; TRONCOSO, MARÍA F.; RABINOVICH, GABRIEL A.; WOLFENSTEIN-TODEL, CARLOTA; COMPAGNO, DANIEL; ELOLA, MARÍA TERESA

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina.

Congreso; LVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica. LVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS). II Congreso Nacional y IV Reunión Científica Regional por el Bienestar del Animal de Laboratorio y; 2011

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La galectina-8 (Gal-8) es una lectina caracterizada por poseer dos dominios que ligan carbohidratos unidos por un péptido bisagra, y al menos 7 isoformas (Gal-8a) generadas por splicing alternativo. Hemos demostrado previamente que Gal-8 posee efecto pro-migratorio y pro-angiogénico en células endoteliales. Nuestro proyecto apunta a evaluar la influencia de la galectina-8 en el proceso metastásico del cáncer de mama y estudiar si el splicing alternativo cambia durante la progresión tumoral. Son nuestros objetivos: 1-Examinar la expresión de Gal-8 total en las líneas celulares tumorales mamarias MDA-MB-231, T47D y MCF-7 mediante RT-PCR en tiempo real. 2-Cuantificar la expresión de la isoforma Gal-8a en las células MDA-MB-231, T47D y MCF-7 mediante RT-PCR cuantitativa. 3-Determinar el rol de la isoforma Gal-8a en la migración de células MDA-MB-231. Mediante RT-PCR en tiempo real, se demostró una mayor expresión de Gal-8 total en las células de la línea de carcinoma mamario invasivo MDA-MB-231 respecto a las otras dos líneas no invasivas. Para analizar la expresión de la isoforma Gal-8a, se realizó una cuantificación mediante qPCR, utilizando un plásmido que contiene la secuencia cDNA correspondiente a la isoforma a (pET3a-Gal8a) que nos permitió establecer una curva de calibración. Así, se detectó que las células MDA-MB-231 poseen 2 y 12 veces más transcripto específico de la isoforma Gal-8a que las células T47D y MCF‑7, respectivamente. Este resultado sugeriría que la isoforma a está más expresada en las células de carcinoma mamario más tumorigénicas y metastásicas. Posteriormente, se estudió la migración de células MDA-MB-231 (12.000 células/pocillo) estimuladas con Gal-8a soluble recombinante (0-10 nM), libre de pirógenos. Este estudio se efectuó mediante el ensayo de la herida, realizando una cinética de migración a tiempos 0, 4, 8, 12 y 24 hs después de la lesión. Los ensayos se efectuaron en presencia y ausencia de azúcares inhibidores (lactosa) de la lectina. Los resultados después de 8 hs de migración fueron: Gal-8 (1,25 nM): 39,4 ± 4,3; control: 19,5 ± 2,1; Gal‑8 (1,25 nM) + lactosa: 10,8 ± 0,9 % de cierre de la herida. Por ende, la isoforma Gal-8a induce la migración de células tumorales mamarias MDA‑MB-231 de manera significativa (p<0,05), siendo este efecto glicano-dependiente. Nuestro trabajo se concentra ahora en ensayos in vivo estudiando los papeles de la Gal‑8a en el proceso metastático a fin de identificar nuevos blancos terapéuticos en cáncer de mama.