Inducción de apoptosis por dos vías independientes mediada por Galectina-1 en células tumorales de Leydig

BIRON, VA; TRONCOSO, MF; BESIO-MORENO, M; PIGNATARO, OP; IGLESIAS, MM; WOLFENSTEIN-TODEL, C

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; 50 Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2005

Previamente demostramos que la galectina-1 (Gal-1), lectina que ejerce control sobre la proliferación y muerte celular, afecta la viabilidad de las células de Leydig normales y la línea tumoral MA-10 (cLMA-10). Demostramos además que Gal-1 (400 ug/ml) induce apoptosis en las cLMA-10, dado que el tratamiento con Gal-1 aumenta la actividad de caspasa-3 (170.6±13.8%, 24h, p<0.01; método fluorométrico) e incrementa el porcentaje de células con núcleos apoptóticos (14.2±0.5 vs 33.0±4.1, p<0.01; citofluorometría). Con el objetivo de dilucidar los mecanismos moleculares de dicho efecto, estudiamos la participación de la vía intrínseca en la inducción de apoptosis. La incubación con Gal-1 aumentó significativamente el porcentaje de células con pérdida del potencial de membrana mitocondrial (42.4±3.0%, 6 hs, p<0.01; tinción con el fluorocromo DiOC6), seguido de un incremento en el contenido citosólico de citocromo c (155.5±12.1%, 6 hs, p<0.01; 447.5±15.2%, 12 hs, p<0.001; WB) y un aumento en la actividad de caspasa-9 (271.3±4.2%; 8 hs, p<0.01; método fluorométrico). Por otra parte, evaluamos la activación de la apoptosis por la vía extrínseca. El tratamiento con Gal-1 resultó en un aumento en la actividad de caspasa-8 (243.2±15.5%, 8 hs, p<0.01; método fluorométrico), mientras que no detectamos la presencia de la principal molécula adaptadora, FADD, en células controles o tratadas con Gal-1 (WB). Finalmente, evaluamos si ambas vías se activaban en forma independiente. El ensayo de fragmentación del DNA reveló que, si bien Gal-1 aumentó significativamente el porcentaje de células con núcleos apoptóticos, la presencia del inhibidor específico de caspasa-8 o caspasa-9 inhibió sólo parcialmente el efecto de Gal-1 (24.2±0.6% o 25.3±1.2%, respectivamente, p<0.05). Los resultados sugieren que Gal-1 afecta la viabilidad de las cLMA-10 por inducción de la apoptosis activada tanto por la vía intrínseca como por la vía extrínseca de la apoptosis, en forma independiente