Organogénesis y regeneración de plantas en Arachis glabrata (Leguminosae)

MARÍA LAURA VIDOZ; HEBE YOLANDA REY; LUIS AMADO MROGINSKI

Santa Rosa, La Pampa

Congreso; XXV Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2004

Sociedad Argentina de Fisiología Vegetal

Arachis glabrata es una especie forrajera, perenne y rizomatosa, donde la producción de semillas es poco frecuente. Por este motivo, el desarrollo de sistemas in vitro que permitan la regeneración de plantas adquiere considerable importancia. El objetivo de este trabajo fue obtener un procedimiento in vitro que permita la regeneración de plantas por la vía organogénica. Se trabajó con cinco accesiones de Arachis glabrata (A6138, A6146, AF385, L5 y L6). Se cultivaron porciones foliares de 4mm2, evaluándose la respuesta al emplear diferentes partes de hojas (pecíolos, raquis, parte proximal, media y distal de las láminas) en distintos estados de desarrollo (plegadas, al 80 % de expansión y completamente maduras). En todos los casos, las hojas fueron desinfestadas por inmersión en etanol 70% (30 seg), y luego en una solución de NaOCl 1% más una gota de TweenÒ (12 min). Finalmente se realizaron tres lavados con agua destilada estéril. La incubación se realizó en un cuarto climatizado (27±2 oC, 14 hs de fotoperíodo y 116 mmol m-2 s-1). Cada tratamiento se aplicó a 10 explantes y los experimentos fueron repetidos tres veces. Para la inducción de yemas se empleó el medio de Murashige y Skoog (1962)- MS- suplementado con TDZ (Thidiazurón) en concentraciones entre 1 y 15 mg/L. Los subcultivos se realizaron en los mismos medios de origen, en TDZ 1 mg/L, o en MS. El pH de los medios fue ajustado a 5,8 antes del agregado de 0,65% de agar. Los tubos fueron esterilizados en autoclave (0,101 MPa durante 20 min). Para evaluar la respuesta de los explantes cultivados, se elaboró un índice multiplicando el porcentaje de callos con yemas por el número promedio de yemas por explante, y dividiendo por 100. A los 30 días del cultivo en medios que contenían TDZ, fue posible observar valores del índice variables, de acuerdo a la concentración de TDZ y a la accesión, indicando que existe una marcada influencia del genotipo. Si bien en la accesión AF385 el índice de obtención de yemas fue el más alto (4,5), el mismo disminuyó en todos los casos durante los subcultivos, independientemente del medio empleado para los mismos. Con la accesión mencionada anteriormente, se evaluó también el tiempo de inducción para la obtención de yemas (1; 4; 7; 14; 21 y 28 días), apreciándose que el índice más alto se logró con 21 días en TDZ 6 mg/L seguido por el subcultivo a MS. Al utilizar como explantes distintas partes de hojas en diferentes estados de desarrollo  en la accesión AF385, se evidenció que el índice más alto era obtenido empleando láminas de hojas maduras. Luego del período de inducción, las yemas formadas fueron transferidas a MS cada 20 días, y al cabo de 3 meses aproximadamente, el 7% produjo vástagos, los cuales fueron enraizados en MS + 1 mg/L de IBA (ácido indolbutírico). Como conclusión, se puede decir que si bien existe una marcada influencia del genotipo, el empleo de TDZ posibilitó la obtención de múltiples yemas de A. glabrata, con índices variables de acuerdo a la concentración en el medio de cultivo. El mejor tiempo de inducción resultó ser de 21 días, y los mejores explantes fueron láminas de hojas maduras. Luego de 90 días se obtuvieron vástagos, los cuales enraizaron al ser transferidos a MS+1mg/L de IBA.