Biocontrolador e identificación molecular de Trichoderma sp.

MADRASSI, LUCAS M.; SEÑUK, ANY I.; SOSA, VANESA E.; FONSECA, MARÍA I.; VEDOYA, MARÍA C.

Posadas

Congreso; Congreso Argentino de Estudiantes de Farmacia, Bioquímica y Biotecnología; 2017

Facultad de Ciencia Exactas Químicas y Naturales de la UNaM

El uso de agentes bio-controladores es una de las opciones más consideradas en la actualidad para combatir enfermedades y plagas que afectan a todo tipo de cultivos. Al mismo tiempo los mismos representan una alternativa al uso de productos químicos. El género Trichoderma es uno de los más estudiados como biocontrolador, debido a características que facilitan su obtención, producción e implementación. Es uno de los más frecuentemente aislados del suelo misionero nativo (sin actividad agronómica previa) y para un eficaz aprovechamiento de las cepas encontradas es necesario primero una identificación a nivel de especie por procedimientos microbiológicos clásicos y mediante técnicas moleculares y bioinformáticas; y luego una caracterización de su pontencial biocontrolador en base a una serie de ensayos in-vitro.El objetivo de este trabajo fue identificar taxonómicamente hasta nivel de especie y estimar el potencial biocontrolador de la cepa T4 Trichoderma spp.Metodología. La cepa T4 pertenece a la micoteca de cátedra de MicologÍa la FCEQyN, proviene de suelo misionero. La cepa de Fusarium spp. utilizada como patógeno fue aislada a partir de tejido vegetal y también pertenece a dicha colección. Las pruebas in-vitro para estimar el potencial biocontrolador incluyen co-cultivo directo y exposición del patógeno a metabolitos secretados por T4. En ellas se calcula la proporción en la que el crecimiento de la cepa Fusarium sp., es afectado. Todos los ensayos se realizaron por triplicado, en cajas Petri de 10 centímetros con ágar papa dextrosa (ADP); durante una semana en estufa a 28 a grados sin fotoperíodo. El co-cultivo se llevó a cabo inoculando a la cepa T4 y a la cepa patógena en una misma caja Petri a unos nueve centímetros de distancia entre si y a un centímetro de los bordes. Para el ensayo de producción de metabolitos volátiles se utilizó el método de placas superpuestas Para el ensayo de producción de metabolitos difusibles se utilizó el método del papel celofán. Finalmente, para la identificación molecular se procedió a la extracción y purificación de ADN genómico total y a la amplificación y estudio de la región ITS1-5.8S-ITS4.Los resultado en todas las pruebas se observó una inhibición en el crecimiento del patógeno de al menos un 40%. En ensayos de co-cultivo se observó una inhibición del 65%. En el mismo se evidenciaba un halo inhibitorio de 0.5cm entre las colonias. Además, se observaban signos de micoparsitismo en todos los casos. La inhibición producida en los ensayos de metabolitos volátiles fue de 42%, mientras que la producida en los ensayos de metabolitos difusibles fue del 50%. La identificación molecular permitió la clasificación de T4 como T. asperellum.En conclusión, la cepa T4 clasificada como T.asperellum mostró capacidad de inhibir a Fusarium sp mediante al menos cuatro vías: competencia directa, micoparasitismo y producción de metabolitos tanto volátiles como difusibles