Detección molecular de patógenos virales caninos

MARINA GALLO CALDERÓN; CARINA ROMANUTTI; LETICIA KELLER; OSVALDO PERIOLO; JOSÉ LA TORRE

Buenos Aires

Congreso; XVI Congreso Congreso Nacional de AVEACA; 2016

Asociación de Veterinarios Especializados en Animales de Compañia de Argentina

Introducción: Las principales enfermedades virales de los caninos en Argentina, son el Distemper, la rabia, la Parvovirosis y la laringotraqueitis infecciosa provocada por el Adenovirus canino-2 (AVC-2). En general, las posibilidades de diagnosticarlas con certeza son escasas por la falta de laboratorios especializados o por el alto costo de su ejecución. Estas enfermedades, son las más temibles en clínicas Veterinarias y criaderos caninos.Desde el año 2003, se inició en el ex CEVAN, actual ICT Milstein, la línea de Investigación de Virus de pequeños animales, y se estableció mediante un STAN (Servicio Tecnológico de Alto Nivel) ofrecido por el CONICET, como centro de referencia para el diagnóstico molecular de enfermedades virales caninas.Por el impacto que producen las enfermedades anteriormente citadas, en la salud animal, se hace imprescindible, un diagnóstico molecular, rápido, específico y sensible que permita la identificación inequívoca del patógeno actuante en cada caso, para lograr el diagnóstico diferencial.Materiales y Métodos: en el ICT Milstein, contamos con una batería de ensayos de PCR y RT-PCR, que permiten detectar e identificar diferentes patógenos virales caninos. Para el diagnóstico de CVC y RVC, pedimos a los veterinarios que remitan al laboratorio muestras de materia fecal y lavados traqueobronquiales ó hisopados nasales u oculares, para el diagnóstico de AVC-2. Si el animal está muerto, se solicitan necropsias ó materia fecal. Para el diagnóstico del CaHV-1, se solicitan hisopados de la mucosa ocular, y/o genital y en el animal muerto, se tomarán muestras de órganos. Las muestras, deberán ser colocadas en un tubo estéril, enviarse a 4°C y serán acompañadas por una ficha clínica que incluye información específica de cada animal.se analizaron vacunas comerciales (Coronavirus y Adenovirus), cultivos celulares infectados (Rotavirus) y preparados de necropsias previamente diagnosticadas por inmunofluorescencia (Herpesvirus). La extracción de ADN se realizó con un sistema de adsorción de ácidos nucleicos a partículas de sílica (QiaexII, Qiagen®). La extracción de ARN se realizó con TRIZOL. Para las reacciones de PCR y RT-PCR, se utilizaron primers que reconocen secuencias génicas específicas de cada virus. Resultados: se pudieron detectar los fragmentos génicos esperados, tanto en las vacunas comerciales analizadas, como en los cultivos celulares infectados con los diferentes virus. Para el AVC-2, se amplificó por PCR un fragmento de 1030 pares de bases (pb) del gen E3 y para el CaHV-1, un fragmento de 493 pb del gen TK. Para el caso de CVC y RVC se amplificaron por RT-PCR fragmentos de 409 pb del gen M y 1062 pb del gen 9, respectivamente. Discusión: Conclusiones: En este trabajo, se muestran los resultados preliminares de la puesta a punto de la metodología para detectar a nivel molecular, diferentes patógenos virales. Se dispone así de una batería de diagnósticos rápidos, específicos y sensibles que permiten dilucidar la etiología de las principales enfermedades virales caninas.