Localización subcelular y propiedades fotobiológicas de una ftalocianina de Zinc(II) lipofílica

NICOLÁS A. CHIARANTE; MARINO JULIETA; GARCÍA VIOR M. CECILIA; LÓPEZ ZEBALLOS NOELIA; DICELIO LELIA E.; AWRUCH JOSEFINA; ROGUIN LEONOR

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; Jornadas Con Ciencia 2012, 2do Encuentro de Estudiantes de Farmacia, Bioquímica y otras Ciencias de la Salud; 2012

Programa Con Ciencia, Alianza por los estudiantes, FFyB, UBA

La terapia fotodinámica (PDT) es un procedimiento que consiste en la administración de un agente no tóxico, denominado fotosensibilizador, seguida de la iluminación del tejido blanco con luz de una longitud de onda específica. En presencia de oxígeno el compuesto es activado y genera especies citotóxicas en el sitio de irradiación. Las ftalocianinas (Pc) son fotosensibilizadores promisorios para ser utilizados en PDT.     Previamente evaluamos la acción antiproliferativa en células KB (adenocarcinoma orofaríngeo humano) de una ftalocianina lipofílica (Pc 9) vehiculizada en seis preparaciones liposomales de diferente composición. Los valores de IC50 (concentración de ftalocianina que inhibe el 50% la viabilidad celular) se estimaron a partir de curvas dosis-respuesta. La mayor potencia citotóxica de la Pc 9 se obtuvo en dos de las formulaciones liposomales empleadas, denominadas S-PEG y D2. El propósito del presente trabajo fue: i) investigar la relación entre la potencia citotóxica de las distintas preparaciones lipídicas de Pc 9 y la formación de especies reactivas del oxígeno (ROS), ii) determinar la localización intracelular de la Pc 9. Luego de irradiar las células KB ya tratadas con Pc 9 y liposomas, se estimaron los niveles de ROS con la sonda fluorogénica diacetato de diclorofluoresceína (DCFH-DA) que fluoresce a DCF después de ser oxidada en el interior celular. Si bien se observó un aumento en la producción de ROS para todas las preparaciones liposomales conteniendo Pc 9, un análisis estadístico de los resultados reveló que los niveles más altos provienen de los liposomas S-PEG o D2, que se encuentran entre los más fototóxicos. Asimismo, la localización subcelular de Pc 9 incorporada a S-PEG y a otra formulación menos potente, denominada S, se evaluó por microscopía confocal con las sondas fluorescentes LysoTracker Green (específica para lisosomas) y Mitotracker Green (específica para mitocondrias). Las imágenes de fluorescencia obtenidas mostraron una localización citosólica de Pc 9 independientemente de la preparación de liposomas utilizada. Además, la Pc 9 se detectó mayoritariamente en lisosomas, no siendo evidente una localización mitocondrial.      En conclusión, teniendo en cuenta que las Pc son compuestos hidrofóbicos con una alta tendencia a la agregación, se ha explorado la utilidad de los liposomas como vehículos que permiten mejorar su solubilización e incorporación al interior celular. Sobre la base de los resultados obtenidos se concluye que la potencia fototóxica de la Pc 9 y la formación de ROS en células tumorales es dependiente de la formulación liposomal, y que en forma independiente de su fototoxicidad, las preparaciones lipídicas resultaron ser efectivas como medios para incorporar la Pc 9 preferentemente en vesículas lisosomales.