Análisis genético por técnica de RAPD de Streptococcus agalactiae aislados de neonatos y sus madres

LACZESKI, M.; NOVOSAK, M.; BOBADILLA, F.; LIMANSKY, A.; VERGARA, M.; DELGADO, O.

Rosario

Congreso; XXII Congreso Latinoamericano de Microbiología; 2016

Asociación Argentina de Microbiología

Streptococcusagalactiae(SGB) es la primera causa de infecciones severas invasivas en lactantes menoresde tres meses. Meningitis, neumonía y sepsis son los principales cuadros enestos niños. Estas infecciones se describen como las más graves que puedesufrir un individuo en sus primeras horas de vida, siendo la principal vía deinfección (95%) la transmisión materna. Diversos estudios realizados sobre SGBcon fines epidemiológicos se basan en técnicas moleculares orientadas al estudiode la diversidad genética entre organismos estrechamente relacionados, entreellas se utiliza la amplificación aleatoria de ADN polimórfico (RAPD). Latécnica de RAPD ha ganado amplia aceptación. Es un método accesible y sensiblebasado en el uso de cebadores arbitrarios para amplificar segmentospolimórficos de ADN mediante PCR (reacción en cadena de la polimerasa). Laetapa crítica en la técnica es la selección de cebadores apropiados quepermitan diferenciar cepas de una especie determinada. Los objetivos de este trabajo fueron caracterizargenéticamente SGB aislados de neonatos y sus respectivas madres, y la selecciónde condiciones adecuadas del ensayo de RAPD.Se estudiaron 8 aislamientos de SGB parentalesrecuperados entre 2011-2014 y conservados en leche descremada al 20% y -80°C, 4fueron obtenidos de hisopados vagino-rectales de madres colonizadas, portaciónque fue investigada después del parto y; 4 de hemocultivos de sus respectivosrecién nacidos con diagnóstico de enfermedad invasiva precoz por SGB,recuperados durante las primeras 48 h de vida. Para la técnica de RAPD, seutilizaron los cebadores OPS11, OPB17 y OPB18 con la finalidad de seleccionaraquel con capacidad de discriminar entre cepas no relacionadas genéticamente.Para evaluar la utilidad de cada cebador, se utilizó la fórmula de Hunter yGaston que establece el índice de discriminación (D), siendo necesario un D mayora 0,90 para considerar que los aislamientos pertenecen a clones diferentes. Losperfiles de amplificación observados para los 8 aislamientos, empleandoindependientemente cada cebador, permitieron deducir el D, siendo D=1 para elcebador OPS11, y D=0,84 para OPB17 y OPB18. Por lo tanto, OPS11 fueseleccionado para el estudio de la relación clonal de los aislamientos parentales,encontrándose perfiles de amplificación similares por RAPD para cada parmadre-hijo. A su vez, se han observado diferentes perfiles de amplificación entrelos pares de cepas madre-hijo, lo que revela la discriminación entre cepas norelacionadas. Estos resultados indicaron la transmisión vertical para cada casoestudiado y la robustez del cebador OPS11 usado, para esta colección deaislamientos. Este estudio permitió encontrar condiciones apropiadasdel ensayo de RAPD, lo que es de enorme utilidad para estudios epidemiológicos ligadosa la portación materna y transmisión de un patógeno severo para el reciénnacido, como S. agalactiae, así comoa la eventual transmisión horizontal de esta bacteria.