INVESTIGADORES
ROSSI juan pablo Francisco
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de los cambios conformacionales en la región transmembrana de la PMCA mediante una sonda fosfolipídica
Autor/es:
. IRENE MANGIALAVORI, ANA VILLAMIL GIRALDO, MARIELA FERREIRA GOMES, MARÍA F. PIGNATARO, EMANUEL E. STREHLER Y JUAN PABLO F.C. ROSSI
Lugar:
Los Cocos-Córdoba-Argentina
Reunión:
Congreso; XXXVIII. Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica (SAB).; 2009
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofísica
Resumen:
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El
propósito de este trabajo fue obtener información estructural sobre los cambios
conformacionales de la bomba de Calcio de Membrana Plasmática (PMCA) producidos
por la unión de Ca2+, calmodulina y fosfolípidos ácidos. Hemos
demostrado [1] que los cambios conformacionales en la región citoplasmática son
acompañados por cambios en la región transmembrana de la enzima. La incorporación
específica de [125I]TID-PC/16, un análogo de fosfatidilcolina fotoactivable,
permite estudiar la interfase lípido-proteína [2] y nos permitió demostrar la
existencia de una conformación inhibida en presencia de Ca2+ (E1I)
y una conformación activada (E1A) en presencia de Ca2+ y
calmodulina o tratamientos que simulan los efectos de calmodulina [1].
En este trabajo utilizando esta sonda,
determinamos las constantes de disociación (kD) para Ca2+,
calmodulina, ácido fosfatídico y ácido oleico. Por otra parte, la proteólisis parcial
de PMCA con proteasa V8, permitió identificar las regiones transmembrana que
sufren cambios conformacionales.
Nuestros
resultados indican que: (a) La modulación de la enzima es ejercida a través del
dominio C-Terminal, que induce una conformación auto-inhibida aparente para el
transporte pero no modifica la afinidad por Ca2+ del dominio transmembrana. (b) La unión de
calmodulina provoca una menor incorporación específica de [125I]TID-PC/16
en la región C-Terminal (TM 5-10) y Central (TM 3-4) mientras que en la
activación por ácido fosfatídico, se observan cambios en la región Central (TM
3-4) y N-Terminal (TM 1-2) de la proteína, sugiriendo que estos moduladores
presentan un mecanismo diferente de activación.
En conclusión mostramos que la activación por
fosfolípidos ácidos o calmodulina se produce por modificación de distintas
zonas citoplasmáticas lo que indicaría la existencia de más de una conformación
activada (E1A) y que la unión de Ca2+ en el equilibrio no
se modifica por la presencia de los activadores, aunque disminuya la constante
de afinidad aparente determinada por la actividad ATPasa [3]. Con
subsidios ANPCYT, CONICET, UBACYT y NIH.