Caracterización de la interacción de entre la PMCA y el citoesqueleto de actina

M. C. DE LA FUENTE, J. P. ROSSI, M. FERREIRA-GOMES, L. VANAGAS, M. DALGHI E I. MANGIALAVORI

Mar del Plata-

Congreso; LV. Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC). Mar del Plata- Argentina, 17-22 de Noviembre,; 2010

SAIC

Interacción de las P-ATPasas con el citoesqueleto Marianela Dalghi, Mariela Ferreira Gomes, Candelaria de la Fuente, Irene Mangialavori, Laura Vanagas, Rolando C Rossi y  Juan Pablo Rossi  IQUIFIB-Departamento de Química Biológica, Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA. Junín 956, 1113, Buenos Aires, Argentina. e-mail: mdalghi@qb.ffyb.uba.ar El citoesqueleto es una red de filamentos proteicos del citoplasma que ocupa el interior de todas las células animales y vegetales. En muchas células, el citoesqueleto no es una estructura permanente, sino que se desmantela y se reconstruye sin cesar. Se forma a partir de tres tipos principales de filamentos proteicos: microtúbulos, filamentos de actina –los más abundantes- y filamentos intermedios, unidos entre sí y a otras estructuras celulares. En este trabajo hemos ensayado el efecto de actina sobre tres ATPasas de tipo P: la bomba de sodio potasio (Na,K-ATPasa), la bomba de calcio de membrana plasmática (PMCA) y la bomba de calcio de retículo sarcoplásmico (SERCA). Los experimentos se realizaron sobre membranas aisladas de eritrocitos (PMCA y Na,K-ATPasa), microsomas de células Sf9 (PMCA y SERCA) y en preparaciones enriquecidas de PMCA, de médula roja de riñón de cerdo (Na,K ATPasa) y músculo esquelético de conejo (SERCA). Se midió en cada caso la actividad ATPasa y la fosforilación de la enzima. Los resultados indican que: (1) Las tres P-ATPasas cuando están asociadas a las membranas nativas exhiben un comportamiento de activación cuando se las diluye. (2) En preparaciones purificadas libres de actina (a) las tres P-ATPasas se activan entre 2 y 5 veces, por agregado de actina despolimerizada aislada a partir de músculo esquelético de conejo. (b) la actina polimerizada inhibe totalmente la actividad de las P-ATPasas cuando la reacción de polimerización se efectúa en el medio donde se encuentra la preparación purificada de la enzima (c) Esta inhibición no aparece si se agrega la actina previamente polimerizada sobre la enzima. Estos efectos sugieren que: (a) existe una interacción entre las ATPasas y la actina despolimerizada que produciría activación y que se uniría a un sitio del dominio citoplasmático. (b) La inhibición posterior por la actina polimerizada podría deberse a un aumento en la viscosidad del medio. Estas evidencias sugieren que la actina en las membranas originales podría modificar la actividad de las bombas de transporte en respuesta a los cambios que se producen normalmente en el citoesqueleto. Con subsidios de CONICET, ANPCYT y UBACYT.