INVESTIGADORES
ROSSI juan pablo Francisco
congresos y reuniones científicas
Título:
Modificación de la estequiometría lípido-proteína con el estado de activación en diferentes isoformas del transportador de Ca2+ de membrana plasmática
Autor/es:
IRENE MANGIALAVORI, GERARDO CORRADI, CANDELARIA DE LA FUENTE, DEBORA RINALDI, HUGO ADAMO Y JUAN PABLO ROSSI.
Lugar:
Mar del Plata-
Reunión:
Congreso; LV. Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC). Mar del Plata- Argentina, 17-22 de Noviembre,; 2010
Institución organizadora:
SAIC
Resumen:
Modificación de la
estequiometría lípido:proteína con el
estado de activación en diferentes isoformas del transportador de Ca2+
de membrana plasmática.
Irene C. Mangialavori, Gerardo
Corradi, María Candelaria de La
Fuente, Debora E. Rinaldi, Hugo P. Adamo and Juan P. F. C.
Rossi IQUIFIB (UBA-CONICET) Facultad de Farmacia y
Bioquímica, UBA.irenem@qb.ffyb.uba.ar
La bomba de Ca2+
de membrana plasmática (PMCA) transporta Ca2+ contra el gradiente
electroquímico a partir de la hidrólisis de ATP. Se han identificado varias
isoformas tejido específicas. La isoforma 4b es mayoritaria en eritrocitos
humanos y la 2b se encuentra especialmente en tejido nervioso. La PMCA es
regulada a través de un mecanismo de autoinhibición. El principal modulador de la PMCA es la calmodulina (CaM)
y su unión a la PMCA aumenta la actividad Ca2+-ATPasa concomitante con el cambio conformacional (desde E1I
hacia E1A). El mecanismo de
autoinhibición de la forma 4b es más eficiente que el de la isoforma 2b, por lo
que la isoforma 2b muestra mayor actividad en ausencia de CaM y mayor
sensibilidad a la activación por CaM que la isoforma4b.
En este trabajo
comparamos el número de lípidos en estrecho contacto con la región transmembrana
(anulares) de las isoformas h4b y r2b de la PMCA sobre-expresadas y purificada de Saccharomyces cerevisiae. Para ello se
incorporó un análogo fotoactivable de fosfatidilcolina ([125I]TID-PC/16)
a micelas mixtas de C12E10-PC en las que se reconstituye
la proteína y luego de la fotólisis, se
evaluó la incorporación específica del reactivo y se determinó la
estequiometría lípido:proteína en diferentes conformaciones de ambas isoformas.
La estequiometría
lípido-proteína fue: 19 (ausencia de Ca2+), 29 (presencia de Ca2+)
y 14 (presencia de Ca2+-CaM) y, 18 (ausencia de Ca2+), 23
(presencia de Ca2+) y 17 (presencia de Ca2+-CaM)
moléculas de lípidos por molécula de proteína para la h4b y la r2b,
respectivamente. La titulación del cambio conformacional muestra que la
afinidad por CaM es 30 veces mayor en la isoforma r2b. Estos resultados muestran
que el número de lípidos anulares varía entre isoformas de la PMCA y depende
del estado de activación. Con subsidios
de ANPCYT, CONICET y UBA.