Especifidad del transporte de Cationes por la PMCA

JAITOVICH, MM; ROSSI, J.P.F.C.

Mar Del Plata

Congreso; I Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

Sociedades Biomédicas

ESPECIFICIDAD DEL TRANSPORTE DE CATIONES POR LA PMCA Jaitovich, MM y Rossi JPFC. IQUIFIB. F. F. y B., Junín 956. B. Aires, Argentina mjaitovich@yahoo.com.ar La Ca2+ ATPasa de membrana plasmática (PMCA) de eritrocitos humanos cataliza el transporte de Ca2+. Se ha sugerido que puede transportar otros metales divalentes (Olson y Cazort, 1969, Pfleger y Wolf, 1975). El transporte es activado por calmodulina (CaM). Es conocido que CaM puede unirse a otros metales como el Pb2+ (Kern y col. 2000). Dado que Ca2+ contamina las sales en concentración suficiente para catalizar la PMCA, es difícil determinar la especificidad del transporte de PMCA por otros cationes. Estudiamos la capacidad de hidrólisis del ATP por PMCA con una serie de divalentes midiendo la actividad enzimática con y sin CaM, en ausencia y presencia de Ca2+ contaminante. Las membranas de eritrocitos fueron incubadas con 50 mM de divalente y se determinó el Pi producido (Fiske-Subbarow). Además del Ca2+, el Ba2+ y en menor proporción Mn2+ >Ni2+>Co2+>Cu2+=Pb2+>Sr2+>Sn2+>Fe2+ pueden estimular la ATPasa. Por el contrario Zn2+ y Cd2+ inhiben la actividad. Para evaluar si la activación de PMCA puede deberse a la interacción de CaM con el catión, estudiamos la capacidad de unión de CaM a dichos cationes utilizando la sonda 8-anilino-1-ácido naftalenosulfónico (ANS). Al unirse con un metal adecuado CaM sufre un cambio conformacional, expone sitios hidrofóbicos que interactúan con ANS emitiendo fluorescencia (da Silva y col. 2001). La excitación del complejo CaM–ANS– divalente se realizó a 368 nm y se registró la emisión entre 370 y 570 nm. Se tituló la unión al complejo mediante agregado de EGTA. Los resultados preliminares muestran que Ca2+ y Ba2+ se unen al complejo CaM-ANS, con una Kd de 0.493 ± 0.066 mM y 11.93 ± 4.52 mM respectivamente. Estos resultados sugieren que PMCA puede ser activada no solo por Ca2+, sino tambien por otros cationes divalentes, directamente o a través de su interacción con CaM.