Interacciones Lípido-Proteína en la Bomba de Calcio de la Membrana Plasmática¨

MANGIALAVORI IRENE; VILLAMIL GIRALDO, A. M.; ROSSI, J.P.F.C.

MAR DEL PLATA

Congreso; LII Annual Scientific Meeting. Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2007

SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACION CLINICA

Interacciones lípido-proteína en la Bomba de Calcio de Membrana plasmática Mangialavori Irene Cecilia, Villamil Giraldo Ana María, Rossi Juan Pablo F.C IQUIFIB. Departamento de Química Biológica. Universidad de Buenos Aires e-mail: irenem@qb.ffyb.uba.ar   La Bomba de Ca2+ de Membrana Plasmática (PMCA) es una P-ATPasa que transporta Ca2+ contra gradiente electroquímico, cumpliendo un papel fundamental en el mantenimiento de las concentraciones fisiológicas intracelulares de Ca2+. La PMCA es una proteína de 134 KDa, cuya zona hidrofóbica contiene diez segmentos transmembránicos y la citoplasmática tres dominios definidos. El dominio C-terminal incluye el sitio de unión a calmodulina (CaM). En condiciones basales la bomba se encuentra autoinhibida. Cuando CaM se une a la bomba, se produce un cambio conformacional que produce la máxima afinidad y velocidad de transporte de Ca2+. Para estudiar si esto cambia la relación de la enzima con su entorno lipídico utilizamos dos técnicas diferentes: fotomarcación con [125I]TID-PC/16 y FRET entre la proteína marcada con Isotiocianato de eosina (EITC-PMCA) y Rodamina-PE, para estudiar el dominio transmembrana y el citoplasmático, respectivamente. Ambas estrategias incluyen la reconstitución de PMCA purificada de eritrocitos humanos en micelas de detergente. Nuestros resultados muestran que la unión de Ca2+ aumenta 80% la exposición de restos hidrofóbicos en los segmentos transmembrana y que esta exposición disminuye a menos del 50% cuando se une CaM. La transferencia de energía entre EITC-PMCA y RhoPE aumenta ligeramente al unirse Ca2+ a la PMCA pero no cambia significativamente al unirse CaM, sugiriendo que el segmento citoplasmático no modifica la región hidrofóbica. La transferencia disminuye en forma similar cuando la sonda es diluida con distintos lípidos, sugiriendo que la zona estudiada no presenta afinidad diferencial por los lípidos. Estos resultados indican que los movimientos conformacionales de la zona citoplasmática al unirse los distintos efectores se traducen en movimientos de los segmentos transmembrana. Con subsidios de ANPCYT, CONICET y UB