Determinación de la distribución de tamaños de liposomas por Ultracentrifugación Analítica

CARUSO B.; GARCÍA D.A.; CLOP P.; PERILLO M.A.

Los Cocos, Córdoba

Congreso; XXXVIII Reunión de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2009

Sociedad Argentina de Biofísica

La Ultracentrifugación Analítica (AUC) es una poderosa técnica que permite la caracterización en tiempo real del comportamiento de macromoléculas en solución. La utilización de esta metodología, asociada a diferentes métodos de análisis de datos, ha demostrado su rigurosa capacidad para determinar los cambios conformacionales de macromoléculas, las constantes de equilibrio y hasta parámetros termodinámicos de asociación-disociación. Si bien su utilización más extendida en la actualidad es en el campo de la proteómica, sus principios pueden ser totalmente aplicados al campo de coloides, polímeros. liposomas o micelas. En el presente trabajo se estudia la capacidad de la AUC para determinar la distribución de tamaños de liposomas utilizando una Ultracentrífuga Analítica Optima XL-A equipada con un sistema de espectroscopía UV-Vis. Para ello se fabricaron SUVs de dpPC los cuales fueron sometidos tanto a AUC como a DLS (Dynamic Light Scattering), para correlacionar los resultados obtenidos por ambas técnicas. Las distintas muestras estudiadas correspondieron a la misma población de SUVs mantenida a 4ºC, de la cual se fueron extrayendo distintas alícuotas para los sucesivos análisis en función del tiempo hasta 120 hs. La distribución de los Coeficientes de Sedimentación (S) de las diferentes muestras se determinó  mediante experimentos de Velocidad de Sedimentación cuyos datos fueron analizados por el método de Derivada del Tiempo utilizando el software asociado al equipo. Se observó una correlación del tamaño de las partículas obtenido mediante DLS y el Coeficiente de Sedimentación. La cuantificación de dicha relación permitió obtener valores del volumen específico parcial dependientes del tamaño de los liposomas.