INVESTIGADORES
GARCIA Daniel Asmed
congresos y reuniones científicas
Título:
Efectos de compuestos fenólicos gabaérgicos sobre la estabilidad de membranas modelo.
Autor/es:
ANGELETTI S.C.; PERILLO M.A.; GARCÍA D.A.
Lugar:
Carlos Paz
Reunión:
Congreso; Nanocórdoba 2012; 2012
Institución organizadora:
UNC-CONICET
Resumen:
El
receptor GABAA (R-GABAA) es el principal receptor
inhibitorio del Sistema Nervioso Central. Nuestro grupo ha descripto que varios
compuestos fenólicos derivados del propofol, un conocido agente gabaérgico,
poseen efectos estimulatorios sobre el R-GABAA. Por otra parte,
demostramos que estos compuestos son altamente lipofílicos con capacidad para
interactuar con membranas modificando sus propiedades. De esta manera, teniendo
en cuenta que el R-GABAA está inserto en una estructura
supramolecular altamente dinámica como la membrana, es posible sugerir que en
los efectos farmacológicos demostrados para este tipo de compuestos podrían
subyacer fenómenos inespecíficos como disparadores de la modulación de la
organización molecular. Para investigar esta
hipótesis se desarrolló un método espectrofluorimétrico para la determinación de la
permeabilidad al Cl- a través de membranas modelo, y
se ensayó, en este modelo, el efecto del compuesto fenólico clorotimol.
Las
técnicas más comunes para medir la concentración de Cl- utilizan electrodos
intracelulares, cloruro radioactivo o indicadores fluorescentes sensibles a Cl-.
En este trabajo se utilizó el fluorescente MEQ (6-metoxy-N-etyl quinolina) cuya
fluorescencia puede ser apagada por iones halógenos tales como el Cl-.
Se analizó la disminución en la intensidad de fluorescencia emitida por MEQ a
diferentes concentraciones del Cl- lo cual permitió obtener un valor
de la constante de Stern-Volmer de 125 M-1 en solución acuosa.
Posteriormente
se prepararon vesículas unilamelares grandes (LUVs) de fosfatidilcolina de
huevo:colesterol (90%:10%) con un diámetro de ~200
nm (determinado por dispersión dinámica de la luz, DLS) en presencia de MEQ. Mediante
cromatografía de exclusión molecular se separaron las facciones de fluoróforo
atrapado en liposomas y el libre. Para esto, en las diferentes fracciones eluídas
de la columna, se evaluó el contenido de fosfato y la turbidez (asociados con
la presencia de lípidos) y la intensidad de fluorescencia emitida por MEQ. La
co-elución de lípido y fluorescencia correspondió a MEQ atrapado mientras que la
presencia de un pico de elución con alta intensidad fluorescencia y ausencia de
lípidos se interpretó como MEQ libre.
Finalmente,
se utilizó la fracción de MEQ atrapado en LUVs en un medio dispersante
conteniendo Cl-, en presencia y en ausencia del compuesto fenólico clorotimol. Los
resultados indican que el clorotimol interactuaría con la membrana desestabilizándola lo cual lleva al aumento en su
permeabilidad al Cl-. Esto permitiría
que MEQ y Cl- se pongan en contacto tal como se demostró por un aumento en el
apagamiento de la fluorescencia del MEQ en presencia de clorotimol respecto al
control sin este compuesto.