Nanoanticuerpos, potenciales moléculas antivirales para el virus de influenza A

PAVAN, MF; GÓMEZ, JM; IBAÑEZ, LI

Vaquerías Córdoba

Congreso; XXXIX REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE VIROLOGÍA; 2019

Sociedad Argentina de Virologia - SAV

El virus de influenza A causainfecciones respiratorias en humanos y animales, y es responsable de epidemiasestacionales en todo el mundo. Hasta ahora, las vacunas son la medida másefectiva para prevenir dichas infecciones, mientras que los antiviralesrepresentan una segunda estrategia para el control de la infección. Sinembargo, la aparición de múltiples cepas resistentes a estos antivirales hamarcado la necesidad de una mejora en el desarrollo de fármacos y de nuevasestrategias antivirales. Teniendo en cuenta esta necesidad, se han desarrolladonanoanticuerpos (VHHs) que reconocen una región conservada de la hemaglutinina(HA) de influenza. Los VHHs corresponden a la región variable de losanticuerpos de cadena pesada de camélidos y poseen ventajas en relación con losanticuerpos monoclonales, como su alta afinidad, especificidad, estabilidad ysolubilidad y su bajo peso molecular y costo de producción. En este trabajoproponemos expresar y purificar los VHHs desarrollados y determinar elreconocimiento de los mismos frente a distintos tipos de virus de influenza A.A su vez, se plantea estudiar la capacidad inhibitoria de los VHHs monovalentesfrente a la infección viral en modelo de ratón.Para la expresión de los VHHsmonovalentes y bivalentes se utilizaron bacterias BL21, las cuales fuerontransformadas con vectores de expresión pHEN6 que contienen la secuencia de losVHHs. Los mismos se obtuvieron en forma soluble desde periplasma y sepurificaron mediante cromatografía de afinidad utilizando resinas de níquel.Tanto la expresión como purificación de los VHHs se analizó mediante Western Blot y teñido con Coomassie Blue Brillant. Por otra parte,la capacidad de unión de los VHHs a los distintos tipos de virus de influenzase analizó mediante la técnica de ELISA, en donde se cubrieron microplacas (Maxisorp)con diluciones conteniendo 16 unidades hemaglutinantes de los diferentessubtipos de virus. Para el estudio de la capacidad inhibitoria, se utilizaronratones BALB/c, a los que se administró intranasalmente VHHs en diferentesconcentraciones, seguido de un desafío con el virus pH1N1. El peso de losratones se monitoreó durante 14 días.Se lograron producir VHHsmonovalentes y bivalentes, con rendimientos considerables, que tienen capacidadde reconocimiento heterotípica, ya que reconocen virus de influenza dedistintos grupos filogenéticos. A suvez, los estudios preliminares en modelo de ratón mostraron que los VHHs poseencierta tendencia a proteger de la infección viral.En este trabajo demostramosque es posible producir VHHs, que reconocen distintos tipos de virus deinfluenza, de manera sencilla, a bajo costo y con mucha pureza. Los VHHsgenerados serán utilizados para continuar con estudios in vitro e in vivo de lainhibición de la infección viral.