Expresión y purificación de Nanoanticuerpos con diferentes formatos para la detección de la proteína HA de Influenza y la inhibición de la infección viral

PAVAN MF; GOMEZ JM; IBAÑEZ LI

Ciudad de Buenos Aires

Jornada; IX Jornadas Jóvenes Investigadores FVet UBA; 2019

Facultad de Ciencias Veterinarias UBA

El virus de influenza causa infecciones respiratorias en humanos y animales, y es el responsable de epidemias estacionales en todo el mundo. Hasta ahora, las vacunas son la medida más efectiva para prevenir dichas infecciones. Por otra parte, los antivira les representan una segunda estrategia para el control de la infección. Sin embargo, la aparición de múltiples cepas resistentes a estos antivirales ha marcado la necesidad de una mejora en el desarrollo de fármacos y de nuevas estrategias de antivirales. Teniendo en cuenta esta necesidad, se han desarrollado nanoanticuerpos (NAcs) que reconocen la proteína HA del virus de influenza A. Los NAcs corresponden a la región variable de los anticuerpos de cadena pesada de camélidos y poseen ventajas en relación con los anticuerpos monoclona les, como su pequeño tamaño, gran estabilidad, alta solubilidad y especificidad y producción a menor costo. En este trabajo proponemos expresar y purificar los NAcs desarrollados y estudiar el reconocimiento de los mismos frente a distintos tipos de virus de influenza. A su vez, se plantea estudiar la capacidad inhibitoria de los NAcs monovalentes frente a la infección viral en un modelo de ratón. Para la expresión de los NAcs monovalentes y bivalentes se utilizaron bacterias BL21, las cuales fueron transformadas con vectores que contienen la secuencia de los NAcs. Los NAcs se extrajeron desde periplasma mediante shock osmótico y la purificación de los mismos se realizó mediante cromatografía de afinidad utilizando resinas de níquel. Tanto la expresión como purificación de los NAcs se analizó mediante Western Blot y teñido con Coomassie Blue Brillant. Por otra parte, la capacidad de unión de los NAcs a los distintos tipos de virus de influenza se analizó mediante la técnica de ELISA, en donde se cubrieron microplacas (Maxisorp) con diluciones conteniendo 16 unidades hemaglutinantes de los virus. Para el estudio de la capacidad inhibitoria, se utilizaron ratones BALB/c, a los que se administró intranasalmente NAcs en diferentes concentraciones, seguido de un desafío con el virus pH1N1. El peso de los ratones se monitoreó durante 14 días. Se lograron producir NAcs monovalentes y bivalentes puros y con rendimientos considerables, que tienen capacidad de reconocimiento heterotípica (reconocen virus de distintos grupos filogenéticos). A su vez, los estudios preliminares en modelo de ratón mostraron que los NAcs poseen cierta tendencia a proteger de la infección viral. En este trabajo demostramos que es posible producir NAcs, que reconocen distintos tipos de virus de influenza, de manera sencilla, a bajo costo y con mucha pureza. Los NAcs generados serán utilizados para continuar con estudios in vitro e in vivo de la inhibición de la infección viral.