OBTENCIÓN DE NANOANTICUERPOS QUE RECONOCEN REGIONES CONSERVADAS DE LA PROTEÍNA HA DE INFLUENZA APLICABLES A LA PRODUCCIÓN DE ANTIVIRALES

PAREDES ROJAS YESICA; CALDEVILLA CECILIA; MATTION NORA; IBAÑEZ, LORENA ITATÍ

Buenos Aires

Simposio; IV Simposio Internacional de Virología Clínica y Avances en Vacunas; 2016

En 1989 se descubrieronanticuerpos no convencionales en miembros de la familia Camelidae. El único dominio variable de estos nuevos anticuerpos, conocidocomo Nanoanticuerpo (NanoAc), puede reconocer antígenos de manera específica ycon gran afinidad. Los NanoAcs presentan la ventaja de ser hidrosolubles, de poderser expresados a bajo costo en microorganismos y de ser fácilmente modificados paramejorar sus propiedades. Se ha reportado el uso exitoso de NanoAcs para inhibiry detectar varios tipos de virus, entre ellos VIH, HBV, Influenza, RSV y FMDV. Elvirus de influenza afecta a humanos y animales, se propaga alrededor del mundoa través de epidemias estacionales. La glicoproteína hemaglutinina (HA) deinfluenza contiene una secuencia en la región del tallo (DeltaHA) que estárelativamente conservada y que ha sido utilizada para generar anticuerpos concapacidad de inhibición de varias cepas virales. En este trabajo reportamos laobtención de NanoAcs que reconocen dicha región en virus de influenza H3 y H5,que tienen el potencial del funcionar como moléculas antivirales.Conel fin de obtener los NanoAcs, dos llamas fueron inmunizadas con proteína recombinanteDeltaHA de los subtipos virales H3 y H5. Una vez alcanzada una respuesta inmuneadecuada, se extrajo ARN de linfocitos, se preparó ADNc y se amplificaron losfragmentos codificantes de los NanoAcs mediante PCR. Dichos fragmentos fueronclonados en vectores fagémidos que luego fueron transformados en bacteriasTG1.Dichas células fueron infectadas con un fago helper con el fin de seleccionar NanoAcs con capacidad dereconocimiento específico de DeltaHA mediante la técnica de phage display. Mediante esteprocedimiento se generaron dos bibliotecas de NanoAcs con aproximadamente 1x108clones individuales. La eficiencia de inserción de clones de tamaño correctofue cercana al 90%. Se seleccionaron tres clones que reconocen la proteína H3 ynueve que reconocen H5. Dichos clones fueron subclonados en vectores deexpresión para obtener NanoAcs en alta concentración que serán posteriormenteutilizados en experimentos de inhibición de la infección viral in vitro e in vivo. Se espera obtenerNanoAcs inhibitorios de la infección viral, que en lo posible actúen frente a múltiplescepas virales.