Secreción y reciclado vesicular en células cromafines de la médula adrenal de ratones normales y KO para canales de Ca2+ de tipo P/Q.

LORENA I. IBAÑEZ; OSVALDO D. UCHITEL ; FERNANDO D. MARENGO.

Córdoba

Taller; Taller de Neurociencias; 2003

Se evaluó la exocitosis, endocitosis y reciclado vesicular en células cromafines por medio del monitoreo de la captación y posterior lavado del fluoróforo FM1-43. Los experimentos se realizaron sobre cultivos primarios de células cromafines obtenidas de glándulas adrenales de ratones. Una despolarización con K+ 50 mM durante 3´ indujo una exocitosis equivalente al 66.8±4.6% de la membrana plasmática inicial. La mayor parte (44.2±2.6%) de este proceso se produjo en los 10? iniciales, lo cual supone una velocidad de reciclado de 4.4% de la membrana por segundo. Luego de lavar el FM1-43 extracelular, quedó retenido dentro de la célula el equivalente a un 85% de la marca de la membrana plasmática inicial. Esto sugiere que un proceso endocitótico mayor al proceso exocitótico (endocitosis sobrecompensatoria) se dearrolló en estas células, lo cual ha sido descrito para potentes estímulos que generan exocitosis masiva. Una nueva despolarización con 50 mM de K+ indujo la liberación de solamente un 30% de la marca retenida. Esto sugiere que, en nuestras condiciones experimentales, una fracción importante de la membrana endocitada se cicla en forma extremadamente lenta. Finalmente se estudió el efecto de la supresión de los canales de Ca2+ tipo P/Q. Células provenientes de ratones KO para la subunidad a de estos canales estudiadas electrofisiológicamente no mostraron diferencias en densidad de corriente de Ca2+ total con los individuos salvajes. De la misma manera, los KO no presentaron diferencias en la respuesta exocitótica (72.1±6.8%), ni en la velocidad inicial (4.8±0.7% de membrana por segundo). Esto sugiere que algún otro canal está compensando la falta de los P/Q y activando la secreción con igual eficacia que estos.