La exposición a insecticidas en Cydia pomonella induce cambios en la expresión génica de las enzimas carboxilesterasa y citocromo P450

PARRA LAURA; CICHON LILIANA; GARRIDO SILVINA; MONTAGNA MÓNICA; GUIÑAZÚ NATALIA

San Luis

Congreso; VII Congreso Argentino de la Sociedad de Toxicología y Química Ambiental; 2018

Sociedad de Toxicología y Química Ambiental

El control químico de la plaga Cydia pomonella se realiza con diferentes familias de insecticidas, como los organofosforados y neonicotinoides, dirigidos a las larvas neonatas. Sin embargo, el estadio adulto también está expuesto. El estrés causado por la exposición a concentraciones subletales puede alterar la transcripción de las enzimas detoxificantes citocromo P450 y carboxilesterasa. La inducción de estas enzimas en insectos se asocia con la resistencia a insecticidas.El objetivo de este trabajo fue analizar el nivel de expresión génica de enzimas detoxificantes en adultos de C. pomonella de campo expuestos a concentraciones crecientes de clorpirifós y acetamiprid.Se estudiaron las enzimas citocromo P450 (CYP9A61) y carboxilesterasa (Cp-CE1) en adultos provenientes de una población de campo. Se expusieron individuos de 1-2 días de edad, a concentraciones de clorpirifós (0,0625; 1; 15,62 mg/L) y acetamiprid (6,25; 25; 50; 100 mg/L) durante 24 hs a 25°C y 16:8 h L:O. Estas concentraciones fueron seleccionadas en base a resultados previos. Los controles fueron expuestos al diluyente. Por individuo se extrajo RNA total (TRIzol reagent). A continuación se retrotranscribió 2 μg de ARN, utilizando cebador oligo (dT). Para la reacción de qPCR, se utilizaron primers para CYP9A61 (KC:832920.1), Cp-CE1 (KC:832922.1), beta-actina (KC832921) y el reactivo SyBrGreen (Bio-Rad). Se determinó la eficiencia de los primers. En todos los ensayos se incluyeron controles negativos y un control interno de expresión constitutiva. Los niveles de expresión fueron calculados según el método de 2 ?ΔΔCt.Los resultados preliminares indicaron un aumento significativo en la expresión de Cp-CE1 en los individuos expuestos a 0,0625 mg/L de clopirifós respecto al grupo control. Además, se observó un aumento significativo en la expresión de CYP9A61 a la concentración de 1 mg/L de este insecticida. En contraste, los individuos expuestos a acetamiprid no se evidenciaron cambios significativos de Cp-CE1. La expresión de CYP9A61 se incrementó significativamente en los individuos tratados con 25 y 50 mg/L, alcanzando valores relativos entre 200 y 80 veces mayores a los individuos no tratados, respectivamente.En conjunto estos resultados preliminares demuestran que tanto la expresión génica de CYPA961 y Cp-CE1 son moduladas en C. pomonella por la exposición a estos insecticidas. Asimismo, se demostró que los cambios en la expresión de ambas enzimas varían según la familia de insecticida