Caracterización molecular de aislamientos de CTV (cítrus tristeza virus)

GAGO-ZACHERT, SELMA P.; ROBLEDO, GERMÁN; COSTA, NORMA; SEMORILE, LILIANA C.; GRAU, OSCAR

Mendoza

Congreso; XXXV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular (SAIB); 1999

Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular (SAIB).

CTV (citrus tristeza virus), agente causal de la tristeza de los cítricos, posee un genomas ssRNA (+) de 19,3 kb y dos proteínas de cápside de 25 y 27 lD, que cubren el 95 y el 5% de la partícula viral respectivamente. Los aislamientos virales difieren en sus características biológicas, tales como transmisibilidad por áfidos o síntomas en especies hospedadoras y constan de poblaciones complejas de diferentes RNAs genómicos, subgenómicos y defectivos. La caracterización tradicional por indexing biologico en plantas indicadoras resulta un procedimiento largo y costoso. Por ello se desarrollaron métodos basados en el estudios del genoma viral que permiten identificar aislamientos débiles y severos y analizar la estructura de la población presente en un aislamiento. Los clones de una biblioteca de cDNA obtenida de dsRNA de un aislamiento de campo se secuenciaron completamente y se hibridaron con sondas de cDNA preparadas a partir de dsRNA de aislamientos virales de diferentes biotipos y orígenes geográficos. A partir de los resultados de Southern blot se seleccionaron once regiones genómicas virales que mostraron hibridación diferencial con las sondas utilizadas y que podrían relacionarse con patogenicidad. Estas regiones corresponden a: dominios proteasas (Pro), metiltransferasa (MT), helicasa (HEL) e interdominio MT/HEL de la poliproteina viral; regiones 5´y 3´ del gen p65 (proteína tipo HSP70), gen p27 (proteína de cubierta minoritaria), región intergénica p25 (CP)/ p18 (función desconocida); gen p20 (función desconocida) y gen p23 (RNA dinding protein). Ensayos de hibridación en dot blot con estas regiones como sondas permitieron diferenciar aislamientos débiles (biogrupos I yII) de aislamientos severos (biogrupos III, IV y V). Por otra parte, la estructura poblacional de CTV se analizó por SSCP aplicados a dos genes: p27 (dCP) y p25 (CP), en once aislamientos argentinos de campo. Se observó: 1) ambos genes presentan una gran conservación a nivel nucleotidico en los aislamientos analizados; 2) que el gen p25 muestra mayor variabilidad intrapoblacional que el gen p27; 3) que la mayoría de los aislamientos presenta el mismo patrón mayoritario para el gen p25, sugiriendo una mayor presión de selección para la CP mayoritaria y 4) ausencia de correlación entre las características biológicas y secuencias nucleotídicas en los genes analizados.