Caracterización estructural parcial de baltergina-DC.

VAN DE VELDE, ANDREA C.; MORITZ N.O., MILENE; DOS SANTOS, PATTY K.; SELISTRE DE ARAUJO S, HELOISA; GAY CLAUDIA C.

Resistencia

Congreso; XXIII Comunicaciones Cientificas y Tecnologicas - 2017; 2017

Universidad Nacional del Nordeste

Bothrops alternatus es un vipérido extensamente distribuido en América del Sur que representa una de las especies más importantes asociadas aaccidentes por ofidios en Argentina. Las metaloproteinasas de veneno de serpientes (SVMPs) representan el 43,1% de los componentes identificadosen el veneno de B. alternatus y desempeñan un papel importante en el envenenamiento, causando efectos locales relevantes. Las SVMPs sepueden dividir en tres clases (PI a PIII) de acuerdo con la presencia de varios dominios estructurales. Las enzimas pertenecientes a la subclase PIIIb,son aquellas que por autoproteólisis liberan un fragmento de 30 kDa correspondiente a los dominios similar a disintegrina / rico en cisteína.Previamente se ha demostrado que baltergina, una PIIIb-SVMP aislada del veneno de B. alternatus es capaz de autolizarse in vitro, dando lugar a unfragmento estable de 28 kDa (baltergina-DC) con capacidad de inhibir la adhesión celular. En este trabajo, se llevó a cabo la purificación del fragmentode obtenido por autoproteólisis de baltergina y su caracterización estructural parcial, a través de secuenciamiento N-terminal por método de Edman.Inicialmente, se incubó a baltergina a 37°C por 96h y la mezcla de fragmentos de la autoproteolisis se separó por cromatografía de filtración en gel. El perfilde elución mostró dos fracciones, las mismas se analizaron por SDS-PAGE en condiciones reductoras. La fracción correspondiente a 28kDa, baltergina-DC, se transfirió a una membrana de PVDF y posteriormente se determinó la secuencia aminoacidica. Por último, se realizó el análisis de alineamientomúltiple con secuencias conocidas de jararhagin-C y alternagin-C, los resultados mostraron un alto grado de homología de baltergina-DC con estasproteínas DC obtenidas por autólisis de SVMPs ó aisladas a partir de veneno. De esta manera se comprueba la estructura primaria parcial de baltergina-DC. Estudios posteriores, podrán discernir si baltergina-DC y alternagin- C presentan diferencias estructurales y biológicas significativas. Estainformación ha de ser tenida en cuenta para dilucidar, junto estudios ulteriores, si este fragmento carente del dominio metaloproteinasa reúnecaracterísticas estructurales que le otorguen potencialidad farmacológica, específicamente en el campo de los anti-metastásicos, por reunir en susecuencia un dominio desintegrina.