Neutralización de alteraciones hemostáticas inducidas por el veneno de Bothrops alternatus mediante inhibidores de proteinasas y anticuerpos específicos anti-baltergina

VAN DE VELDE, ANDREA C.; GAUNA, MARÍA DEL C.; ACOSTA, OFELIA C.; LEIVA, LAURA C.; GAY, CLAUDIA C.

Corrientes

Otro; Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2012. http://www.unne.edu.ar/investigacion/com2012/exactas.php; 2012

Secretaría General de Ciencia y Técnica - UNNE

El género Bothrops causa el 97% de los accidentes por ofidios en Argentina. Bothrops alternatus (yarará grande) es una de las especies de importancia médica en la región noreste. La intoxicación por este género provoca proteólisis de tejidos, hemorragia y trastornos de la coagulación. La alteración de los parámetros hemostáticos se produce por desfibrinogenación. Las enzimas coagulantes pertenecen a dos familias de proteinasas: las serinoproteinasas con actividad similar a trombina, y las metaloproteinasas que actúan como activadores de protrombina. Las Metaloproteinasas de Venenos de Serpientes (MVS) representan el 50% de los componentes presentes en el veneno de B. alternatus, constituyendo blancos relevantes para el desarrollo de nuevos agentes terapéuticos. En el presente trabajo se estudió la habilidad de anticuerpos producidos contra una metaloproteinasa hemorrágica para contrarrestar las alteraciones hemostáticas del veneno. Se realizó determinación del tiempo de coagulación (TC) enfrentando plasma citratado con veneno de B. alternatus (1 mg/mL) preincubado con PBS (control) y con inhibidores de metalo- (EDTA-Na2) y serinoproteinasas (PMSF) a diferentes concentraciones (0,5 a 5 mM). El EDTA-Na2 5mM fue capaz de provocar un alargamiento en el TC de 6,5 veces respecto al control, sin embargo ya se observó alteración del TC a partir de 1 mM de inhibidor. El PMSF sin embargo, provocó alteración en el TC recién a partir de 5 mM, con un alargamiento de 10 veces el valor del control. Con estos resultados se pudo comprobar la presencia de enzimas coagulantes en el veneno de B. alternatus pertenecientes a ambas familias de proteinasas. Por otro lado, se realizaron inmunoensayos con IgGs específicas obtenidas a partir de conejos inoculados con una metaloproteinasa hemorrágica (baltergina) purificada del veneno de B. alternatus. Mediante el ensayo de Western Blot se comprobó que dichos anticuerpos fueron capaces de reconocer a baltergina y otras proteínas del veneno entero comprendidas entre los 45 y 120 kDa, rango de masas moleculares correspondiente a MVS de la clase P-III (posiblemente antigénicamente relacionadas a baltergina). El ensayo de neutralización del TC preincubando el veneno entero con los anticuerpos anti-baltergina (relación veneno/IgG 1:36), mostró un alargamiento de 4,5 veces respecto al TC del control. Si bien estos resultados son preliminares se comprobó que las IgGs anti-baltergina reconocen, al menos en parte, metaloproteinasas responsables de coagular plasma citratado. Ensayos de neutralización adicionales, tales como la determinación de niveles de fibrinógeno in vivo, permitirán comprender su rol en la alteración de la hemostasia en el accidente botrópico.