Acción de una metaloproteinasa del veneno de Bothrops alternatus sobre la pared vascular.

GAY CLAUDIA C.; MARUÑAK, SILVANA; TEIBLER, PAMELA; PÉREZ GIANESELLI, MÓNICA; GUTIÉRREZ, ÁNGEL; LEIVA, LAURA; ACOSTA DE PÉREZ, OFELIA

Corrientes

Otro; Reunión de Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2010. http://www.unne.edu.ar/investigacion/com2010/CE_Web/wCE-076_077.pdf; 2010

Secretaría General de Ciencia y Técnica - UNNE

La hemorragia es una de las manifestaciones clínicas típicas del envenenamiento botrópico. Entre los componentes enzimáticos de estos venenos,  las metaloproteinasas son las responsables de producir este daño. Se trata de proteinasas zinc-dependientes con importante actividad proteolítica sobre diversos sustratos, capaces además de alterar el sistema hemostático e inhibir la agregación plaquetaria. Para explicar su efecto sobre la hemorragia se ha propuesto un mecanismo de acción iniciado en el área tisular, consistente en la hidrólisis de componentes de la membrana basal del endotelio capilar, el cual conduciría a un debilitamiento de la estructura del vaso que, sumado a las fuerzas hemodinámicas que operan en la microvasculatura, conduciría a una interrupción de la estructura capilar y la consecuente extravasación del contenido sanguíneo. En trabajos previos de nuestro laboratorio se ha aislado y caracterizado bioquímicamente una metaloproteinasa del veneno de Bothrops alternatus. La enzima se nombró baltergina y posee importante actividad hemorrágica a nivel local y sistémico. En el presente trabajo se estudió el efecto de baltergina sobre la pared vascular por Microscopia Electrónica de Transmisión (MET) con el objeto de conocer el mecanismo por el cual se desarrolla la hemorragia. Para ello se inocularon ratones (CF-1, n= 4) por vía i.v. con 50 μg de enzima (5 veces la dosis hemorrágica pulmonar mínima), y se sacrificaron 1 h posterior a la inoculación. Los controles fueron inyectados con 100 μL de PBS. Segmentos de tejido pulmonar y renal de los animales (controles/tratados) se fijaron en glutaraldehído y posteriormente, se fijaron con tetróxido de osmio según la técnica habitual para MET. Los cortes se examinaron con microscopios Zeiss 10 C (Zeiss, Alemania) y JEM-1200 EX II (JEOL, Japón) pertenecientes al Laboratorio Nacional de Investigaciones y Servicios de Microscopía Electrónica (UBA-CONICET) y al Servicio Central de Microscopía Electrónica (Facultad de Ciencias Veterinarias, UNLP), respectivamente. En tejido pulmonar se observó una importante lesión a nivel de las células endoteliales de los capilares alveolares con interrupción de la continuidad de la membrana plasmática, además de desorganización y pérdida de la estructura de la membrana basal. La reducción del espesor de la pared endotelial llevó a la ruptura de los capilares con salida de su contenido al espacio alveolar. En algunos capilares se evidenció la pérdida total de su integridad y la aparición de eritrocitos y restos celulares o debris en el espacio alveolar. Por otro lado, los capilares localizados en tejido renal mostraron únicamente congestión sin alteración de su integridad. En conclusión, mediante MET, y por su apropiada resolución y magnificación, se pudo dilucidar  a nivel ultraestructural el mecanismo de inducción de la hemorragia por baltergina, el cual resultó diferente al propuesto en la literatura. Se confirmó que la enzima actuaría desde la luz vascular, directamente sobre la pared de los capilares sanguíneos probablemente degradando proteínas de superficie e interrumpiendo su continuidad.