INVESTIGADORES
GALLO CALDERON Marina Beatriz
congresos y reuniones científicas
Título:
Obtención y evaluación de nuevos inmunógenos que expresan la proteína VP2 del virus de la bursitis infecciosa de las aves
Autor/es:
CARINA ROMANUTTI; KELLER, LETICIA; GALLO CALDERON, MARINA; ZANETTI, FLAVIA
Lugar:
Vaquerias, Cordoba
Reunión:
Congreso; XXXVIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virologia; 2018
Resumen:
La bursitis infecciosa (IBD) es una enfermedad que afecta a pollos jóvenes y que genera importantes pérdidas económicas en la industria avícola. El virus de la bursitis infecciosa (IBDV) produce destrucción de los linfocitos B que maduran en la bolsa de Fabricio de las aves. El control de IBD se realiza principalmente por administración de vacunas basadas en cepas virales atenuadas, que si bien, inducen una respuesta de anticuerpos neutralizantes, generan lesiones en la bolsa interfiriendo en la respuesta a otras vacunas y/o favoreciendo infecciones por otros patógenos. El objetivo de este trabajo fue obtener y evaluar nuevos inmunógenos, seguros y efectivos, para la prevención de IBDV. En este contexto se obtuvo un adenovirus humano recombinante no replicativo, serotipo 5, que expresa la proteína viral 2 (VP2), antígeno inductor de anticuerpos neutralizantes en el hospedador. Para ello, la secuencia nucleotídica codificante de la proteína VP2 se clonó en el vector de entrada pENTR4 Invitrogen y se realizó la reacción de recombinación entre éste y el vector de destino pAd-CMV/V5-DEST (Invitrogen). El plásmido obtenido pAd-CMV-VP2, que contiene además de la secuencia de interés todo el genoma de adenovirus excepto la región codificante para las proteínas E1 y E3, se transfectó en células HEK293A que expresan constitutivamente los productos de los genes virales E1 y E2 permitiendo la formación de las partículas virales infectivas. El stock de Ad-VP2 se cosechó luego de la aparición de efecto citopático y se caracterizó molecularmente. La capacidad inmunogénica del Ad-VP2 se evaluó en el modelo murino aplicando un esquema de inmunización heterólogo combinado con una vacuna basada en ADN (pXL-VP2, plásmido de expresión eucarionte obtenido previamente). Grupos de cinco ratones (cepa BALB/c, hembra de 7 semanas) se inmunizaron por vía im con 100μg de pXL-VP2 o con el plásmido vacío pXL (grupo control). A los 21 días se les administró una dosis de 5x108 UFP del Ad-VP2 o de un adenovirus que expresa la proteína verde fluorescente como antígeno no relacionado (Ad-GFP). La presencia de anticuerpos con reactividad específica se evaluó por ELISA y seroneutralización. Los sueros preinmunes y los de los ratones vacunados con pXL/Ad-GFP no presentaron reactividad contra la proteína VP2 ni actividad neutralizante específica en los ensayos de ELISA y seroneutralización, respectivamente. En cambio, los sueros de los ratones inmunizados con pXL-VP2/Ad-VP2 presentaron valores de DO significativamente mayores que los del grupo control y títulos neutralizantes de IBDV de 64 y 1024 luego del prime y boost, respectivamente. En este trabajo se logró obtener, caracterizar y evaluar en el modelo murino, la capacidad inmunogénica de una vacuna a ADN y de un vector viral no replicativo para la expresión in vivo de la proteína VP2 de IBDV. A futuro se evaluará la inmunogenicidad y la eficacia de los candidatos vacunales en el pollo, hospedador natural de IBDV.