SELECCIÓN DE CEPAS DE TRAMETES SP. NATIVAS DE MISIONES CON ACTIVIDAD CELOBIOHIDROLASA

CONIGLIO R, FONSECA M, VILLALBA L, ZAPATA P.

Congreso; XIII Congreso Argentino de Micología 2014, XXIII Jornadas Argentinas de Micología, 1ra. Reunión de la Asociación Micológica Carlos Spegazzini.; 2014

La celulosa, el principal componente de las paredes celulares vegetales, representa la biomasa renovable más abundante disponible en la tierra. La degradación de este polímero es llevado a cabo en la naturaleza por un gran número de cepas fúngicas y bacterianas. La hidrólisis de la celulosa requiere de un complejo multienzimático llamado celulasa dentro del cual la celobiohidrolasa es una de las enzimas más importantes, produciendo celobiosa como el principal producto de su acción. En este sentido, estas enzimas son usadas para la sacarificación de los residuos agrícolas que contienen celulosa para la producción de bioetanol. Sin embargo, en el proceso de celulólisis la producción de enzimas es aún el paso crucial y más costoso por lo que actualmente es necesario encontrar nuevas especies de microorganismos altamente productores de celulasas en ambientes naturales y mejorar la producción de enzimas. Esto permitirá contar con una fuente disponible de enzimas celulolíticas como alternativa a las comerciales, de elevado costo. En base a lo expuesto, el objetivo de este trabajo fue seleccionar cepas productoras de celobiohidrolasas. Para ello, se utilizaron 14 cepas autóctonas del género Trametes pertenecientes al cepario del Laboratorio de Biotecnología Molecular, Universidad Nacional de Misiones. Se realizó un ensayo de screening en placa con el fin de detectar la actividad celobiohidrolasa. El sustrato utilizado en este ensayo fue Mu-c (Methyumbelliferyl-cellobioside) el cual se hidroliza mediante la enzima celobiohidrolasa liberando celobiosa. El otro producto de la hidrólisis del reactivo, la metilumbeliferona, es fluorescente cuando se ilumina con luz UV. Los aislamientos crecieron en medio sólido conteniendo extracto de malta 12,7 g/l; agar 15 g/l e incubados a 28°C durante 5 días. Se cortaron tacos de agar cubiertos de micelio (0,5 mm) y luego se transferieron al centro de las placas conteniendo Mu-c 0,1 mM, carboximetil celulosa 0,1 %, extracto de levadura 0,1 % y agar 15 g/l con pH cercano a la neutralidad para la detección de la enzima celobiohidrolasa. Se utilizó medio sin Mu-c y con crecimiento como control (-sustrato) y medio con Mu-c y sin crecimiento como control (-enzima). Los aislamientos crecieron a 28°C durante 5 días y luego se visualizaron bajo luz U.V. De las 14 cepas evaluadas 12 mostraron actividad celobiohidrolasa. Estas cepas fueron entonces seleccionadas como productoras de la enzima celobiohidrolasa y se utilizarán en estudios cuantitativos posteriores.