Optimización de la metodología para la determinación de quitina en muestras de seston. Aplicación de lectinas y microscopia de epifluorescencia

RAMOS CECILIA ; MARTINEZ, A.; BIANCALANA F.

Congreso; Resumen: VI Reunión Argentina de Geoquímica de la Superficie-VI-RAGSU; 2022

Optimización de la metodología para la determinación de quitina en muestras de seston. Aplicación de lectinas y microscopia de epifluorescencia.Ramos, Cecilia 1*; Martínez, Ana 1,2 Biancalana, Florencia 31 Departamento de Química, Universidad Nacional del Sur, Av. Alem 1253, Bahía Blanca, Buenos Aires, Argentina. . 2 Instituto de Química del Sur (INQUISUR-CONICET) Av. Alem 1253, Bahía Blanca, Buenos Aires, Argentina. 3 Instituto Argentino de Oceanografía (IADO-CONICET), Camino La Carrindanga Km 7,5, B8000FWB, Bahía Blanca, Pcia. de Buenos Aires, Argentina. *cecianahi09@hotmail.comUn método para la determinación de quitina en muestras de agua y sedimentos se basa en la tinción de partículas que contienen quitina con fluoresceína aglutinina succinilada de germen de trigo (FITC-WGA) (Montgomery et al. 1990). WGA es una proteína de unión al azúcar que tiene una alta afinidad por los residuos de N-acetil glucosamina residuos (Allen et al. 1973), componente principal de quitina. La quitina es un biopolímero de importancia ecológica constituido por β-(1,4)-N-acetil-d-glucosamine, siendo uno de los compuestos más abundantes en la naturaleza después de la celulosa (Khoushab y amabhai 2010). Se ha demostrado que WGA se une selectivamente a este polímero, incluso cuando las muestras contienen altas concentraciones de celulosa, arcilla y bacterias (Montgomery et al. 1990), y es más específico que Calcofluor para la determinación de quitina (Meyberg 1988). El objetivo principal de este trabajo fue la optimización de la metodología de Montgomery et al. (1990) para determinar quitina en muestras de seston marinas. Se realizaron experiencias para evaluar pH, tiempo de contacto y velocidad de agitación, efecto de filtro interno y efecto matriz. Se optimizó la preparación de los testigos y ajuste de la calibración, así como el tamaño de muestra. Se obtuvo un segmento lineal adecuado para muestras de material particulado en suspensión (MPS) y las fracciones de muestra 20-60, 60-200 y ≥ 200 µm, siendo posible la cuantificación entre 20 y 300 µgmL-1 de quitina. Se destaca que las muestras presentan señales de emisión de fluorescencia inherente variables que dependen del tipo de muestra, contribuyendo hasta en un 38% al valor de intensidad de emisión. Se obtuvieron satisfactorias cifras de mérito en la calibración y se optimizó el procedimiento para la estimación de concentraciones de quitina en muestras de seston marino. ReferenciasAllen, A.K., Neuberger, A., Sharon, N. 1973. The purification, composition andmspecificity of wheat-germ agglutinin. Biochemical Journal 131:155-162.Khoushab, F. y Yamabhai, M. 2010. Chitin Research Revisited. Marine Drugs 8:1988-2012.Meyberg, M. 1988. Selective staining of fungal hyphae in parasitic and symbiotic plant-fungus associations. Histochemistry 88: 197?199. Montgomery, M.T., Welschmeyer, N.A., Kirchman, D.L. 1990. A simple assay for chitin: application to sediment trap samples from the subarctic Pacific. Marine Ecology Progress Series 64:301?308.