Estudio calorimetrico del equilibrio monomero-dimero de tripsina y alfaquimotripsina en funcion del pH.

BURGOS I.,; DASSIE, S.; FIDELIO G.D.

CARLOS PAZ, CORDOBA, ARGENTINA

Conferencia; XXXIV REUNION ANUAL NACIONAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE BIOFISICA; 2005

SAB

La estabilidad térmica de las proteínas es afectada por la presencia de ligandos dependiendo del grado de interacción (1). Los ligandos pueden ser moléculas pequeñas, lípidos organizados u otras proteínas, pudiendo afectar la estabilidad dependiendo si los ligandos se unen al estado nativo o al estado desnaturalizado, o a ambos (1). El incremento en la estabilidad se explica por el acople del los equilibrios de interacción con el equilibrio de desnaturalización de acuerdo a (1,2):            en el presente trabajo aborda el caso de proteínas que dimerizan (homodímeros). Para estos casos se espera cambios en la estabilidad térmica con respecto al estado monómero. Se estudió los cambios en la estabilidad térmica de proteínas ocasionados por la interacción proteína-proteína, empleando la técnica de calorimetría diferencial de barrido (DSC) utilizando como modelos a quimotripsina y tripsina. La técnica de DSC permite visualizar y cuantificar cambios en la capacidad calorífica de un sistema en función de la temperatura. Tripsina y alfa quimotripsina se encuentran predominantemente como monómero entre pH 2 y 3, y dimerizan parcialmente a pH alrededor de 4, pH al cual la constante de dimerización alcanza su máximo valor (3). Trabajando en este rango de pH se observa que los perfiles calorimétricos de ambas proteínas cambian de diferente manera. Para el caso de la alfa quimotripsina, a pH 2.3 se observa un termograma bimodal con dos transiciones cuyas temperaturas de transición (Tm) difieren en 5ºC. La causa de la bimodalidad se debe a la presencia de dos especies: el monómero y el dímero de alfa quimotripsina en equilibrio. La población con mayor Tm es el dímero, el cual se encuentra estabilizado por la interacción proteína-proteína de acuerdo al modelo de acople de equilibrios. Al aumentar el pH la bimodalidad se acentúa reflejando cambios en las propiedades termodinámicas de ambas especies.