Comparación de dos modos de análisis observacional en el ensayo micronúcleos- citoma en eritrocitos de aves

QUERO AAM; FERRE DM; ZARCO A; M TORNELLO; N GORLA,

Mendoza

Jornada; PRIMERAS JORNADAS INTERNACIONALES DE INVESTIGACION, CIENCIA Y UNIVERSIDAD; 2015

Universidad Juan Agustín Maza

ntroducción: Las aves son utilizadas como organismos sensibles para responder al efectode contaminantes ambientales.Los micronúcleos (MN) y otrasalteraciones nucleares puedenser utilizados para reconocer el impacto de estos contaminantes sobre el material genético. Para identificarestas alteraciones y reportar frecuencias de presentación puede ser utilizado un estudio en eritrocitos desangre periférica. Se debería contar con una metodología de análisis observacional estandarizada, a fin dereportar datos que pueden ser utilizados como base dereferencia o comparación fidedigna. Esto implica establecer un número mínimo de células a analizar, en elcual se pueda detectar la mayor variedad de alteraciones posibles por individuos y calcular la frecuencia depresentación para cada alteración por especie.Objetivos: Comparar y determinar el número adecuado de eritrocitos maduros a analizar/ individuo en el ensayo de micronúcleos-citoma en sangre periférica enaves.Metodología: Fueron estudiadas 24 aves de la Reserva de Biosfera de Ñacuñán, Mendoza, capturadas,muestreadas y liberadas. Se realizó un extendido conuna gota de sangre obtenida de la uña del dedo mediode la pata. Las especies en estudio fueron Zoonotrichia capensis hypoleuca (n=8), Zoonotrichia capensisautralis (n=8) y Elaenia albiceps (n=8). Los frotis fueron secados al aire, fijados, y coloreados con Giemsa.El análisis fue realizado de dos modos diferentes: en2.000 y 10.000 eritrocitos en cada uno de los extendidos. Las alteraciones nucleares fueron identificadas apartir de criterios preestablecidos por Carrasco (1990),Tolbert et al (1992) y Kursa y Bezrukov (2008). Fue estimada la frecuencia de cada alteración nuclear porespecie expresada cada 1.000 eritrocitos maduros (X± EEM). Para el análisis de 2.000 y 10.000 eritrocitos se estimó la variedad de alteraciones nucleares encontradas por individuo y mediante test t seestimaron diferencias significativas (p?0,05) entre lasfrecuencias presentadas por alteración nuclear paracada especie entre ambos análisis.Resultados: En las muestras de sangre de las avesestudiadas pudieron ser identificados 6 tipos de alteraciones nucleares: micronúcleos, brotes nucleares, células binucleadas, puentes nucleoplásmicos,colas nucleares y hendiduras nucleares. Pudo observarse que en el 85% de los casos, el análisis de10.000 eritrocitos permitió detectar cualitativamente mayor variedad de alteraciones nucleares en unmismo individuo, en comparación con el análisis de2.000 eritrocitos. Sin embargo, no se detectaron diferencias significativas en la cantidad de alteraciones en términos de frecuencia/ 1000 células.Discusión: De los autores consultados que reportan datos para MN y otras alteraciones nucleares eneritrocitos de aves, concordamos con la mitad deellos, los cuales realizan el análisis en 10.000 eritrocitos. Otros autores realizan el análisis en un númeroinferior a 3.000 eritrocitos y se limitan a reportar lafrecuencia de MN, sin describir otras alteracionesnucleares. Nuestros resultados indican que aquellasalteraciones con muy baja frecuencia de presentación podrían no ser detectadas en el análisis de unnúmero inferior a 10.000 células por animal.Conclusiones: Proponemos estandarizar el análisis de eritrocitos en aves en el ensayo de micronú-cleos citoma en 10.000 células por individuo, parapoder observar una mayor variedad de alteracionesnucleares y poder obtener una frecuencia por especie cercana al valor real poblacional.