Mecanismos de accion de derivados sinteticos del alcaloide indolico tetrahidro-β-carbolina con actividad tripanocida

CASASCO A; MUSCIA G; LOPEZ-ARENCIBIA A; LORENZO-MORALES J; PETRAY PB; PIÑERO J.E; FRANK FM

Resistencia, Chaco

Congreso; XXX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoologia; 2018

Sociedad Argentina de Protozoologia

La enfermedad de Chagas y la leishmaniasis son un importante problema de salud pública en nuestro país, principalmente en el norte, donde las áreas endémicas se solapan. La eficacia de los tratamientos es variable, dependiendo de la especie infectante y la etapa de infección, además de presentar efectos adversos y aumentar la resistencia parasitaria. Previamente, hemos demostrado la actividad de derivados de tetrahidro-β-carbolinas (βC), alcaloides de tipo indolico con un núcleo tricíclico común, frente a distintos estadios parasitarios de Trypanosoma cruzi y Leishmania spp. El objetivo de este trabajo fue estudiar los posibles mecanismos de acción de estos compuestos, luego de la incubación de epimastigotes y promastigotes(1x106/ml) con la concentración inhibitoria 90 (CI90) de los mismos. Se emplearon diferentes metodologías para la búsqueda de los mecanismos de acción producidos por las βC: por tinción con naranja de acridina y microscopia de fluorescencia se detectaron cambios morfológicos y fisiológicos en los parásitos, tales como aparición de vesículas acídicas en el citoplasma y daño nuclear; mediante ensayos con Anexina-V/ioduro de propidio se observó un aumento del porcentaje de parásitos que exponían fosfatidilserina en su membrana luego del tratamiento con algunas de las βC ensayadas; por tinción con Hoechst 33342/ioduro de propidio se verifico que todas las βC produjeron condensación de la cromatina parasitaria; mediante la técnica del colorante fluorescente SITOX®Green se determino que los compuestos no desestabilizaban la membrana celular en las condiciones ensayadas. Debido a la importancia del único mitocondrion presente en tripanosomatidos, se investigo si esta organela es un posible blanco de las βC empleando el indicador selectivo para mitocondrias JC-1. Se observo que la mayoría de los compuestos ensayados fueron capaces de disminuir el potencial de membrana mitocondrial. En un ensayo de viabilidad parasitaria con el reactivo CellTiter-Glo® Luminiscent, verificamos una alteración en el contenido de ATP intracelular. Mediante la sonda fluorescente CellRox®y estudio de microscopia confocal se detecto la acumulación de especies reactivas del O2¿en el citoplasma de los parásitos. Los resultados obtenidos demuestran que las βC ensayadas inducen alteraciones en múltiples dianas parasitarias, incluyendo translocación de fosfatidilserina en la membrana plasmática, disfunción mitocondrial y daño oxidativo, que conducirían a la muerte celular programada de los parásitos probablemente por mecanismos de tipo apoptótico y autofagia.