Actividad tripanocida de imidazoisoquinolinonas tioamida-sustituidas.

FRANK FM; CICCARELLI AB; PUENTE V; BRUNO A; BATLLE A; LOMBARDO ME

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso de Protozoolog¨ªa y Enfermedades Parasitarias; 2011

Trypanosoma cruzi posee una serie de v¨ªas metab¨®licas, diferentes a las del hu¨¦sped que pueden ser utilizadas como blancos terape¨²ticos. Simult¨¢neamente, existen una variedad de productos naturales con actividad tripanocida . El Tryptantrin es un alcaloide aislado de una planta medicinal (Strobilanthes cusia), que presenta actividad antibacteriana y antiparas¨ªtica. A partir de la estructura del Tryptantrin se sintetizaron una serie de derivados (imidazoisoquinolinonas) que mostraron en epimastigotes actividad  anti-T-cruzi.  De estos compuestos seleccionamos cuatro, tres que presentan un grupo tioamida esencial para manifestar mayor actividad (designados C1, C2 y C3) y un cuarto compuesto sin este grupo funcional usado como control (D). Para los cuatro evaluamos actividad anti-T. cruzi in vitro sobre los tres estad¨ªos del par¨¢sito y tratamos de caracterizar su modo de acci¨®n. Observamos para C1 los menores valores de IC50 independientemente del estadio (epi: 1,49¡À0,28¦ÌM, tripo: 34,89¡À1,20¦ÌM, amas: 1,74¡À0,30¦ÌM) y para D los m¨¢s altos. C3 mostr¨® valores similares a los de C1 para epi y amas pero alrededor de 7 veces mayor para tripo. C2 mostr¨® menor actividad que C3. El benznidazol fue usado como droga de referencia (IC50 epi: 5,49¡À0,89¦ÌM y tripo: 30,26¡À2,85¦ÌM) Hasta concentraci¨®n 300¦ÌM C1, C2 y C3 no mostraron citotoxicidad sobre c¨¦lulas Vero. Por ciclovoltametr¨ªa se evidenci¨® la reducci¨®n irreversible de estos compuestos y picos de oxidaci¨®n y reducci¨®n en presencia de glutati¨®n. Considerando el car¨¢cter electrof¨ªlico de los mismos, sobre epimastigotes se evalu¨® el efecto de reductores como DTT (0,4-0,8¦ÌM) y ¨¢cido asc¨®rbico (0,75-1,50¦ÌM), sobre la actividad inhibitoria de C1, observ¨¢ndose  hasta un 100% de aumento. Con glutati¨®n como reductor, a partir de 2,5 ¦ÌM se observ¨® p¨¦rdida completa de actividad inhibitoria (por formaci¨®n del aducto C1-glutati¨®n). El tratamiento con C1 no altera el estado oxidativo intracelular (evaluado con H2DCFDA), las actividades de superoxido dismutasa y ascorbato per¨®xidasa y el contenido total de tioles libres, pero si produce un aumento de hasta 250% de actividad de tripanotiona reductasa. Con DIOC6 y rodamina 123 detectamos despolarizaci¨®n de la membrana mitocondrial, con liberaci¨®n de citocromo c desde la mitocondria al citoplasma (Western-blot). El tratamiento con C1 produce sobre el par¨¢sito muerte celular por apoptosis como indica adem¨¢s el ensayo con anexina V-FITC/ioduro de propidio. En conclusi¨®n las imidazoisoquinolinonas tioamida-sustituidas ensayadas mostraron una importante actividad anti-T. cruzi, que puede ser potenciada por la presencia de un reductor. En base a su car¨¢cter electrof¨ªlico estos compuestos podr¨ªan reducirse en el interior del par¨¢sito a expensas del poder reductor proporcionado por el pool de tioles de bajo peso molecular y el blanco principal para ejercer su acci¨®n tripanocida ser¨ªa la mitocondria. La disfunci¨®n de esta organela ser¨ªa el disparador de la muerte celular por apoptosis.