Liposomas pH-sensibles como agentes anti-amastigotes.

MORILLA MJ; FRANK FM; MONTANARI J; CAZORLA SI; MALCHIODI EL; ROMERO EL; PETRAY PB

Rosario

Congreso; XX Reunión de la Sociedad Arg. de Protozoología; 2004

Sociedad Argentina de Protozoología

Uno de los principales problemas que presenta la erradicación de parásitos intracelulares es que, a menos que existan mecanismos de transporte específicos, difícilmente los fármacos hidrofílicos o de elevado peso molecular accedan masivamente al citoplasma donde ejercen su acción. En este contexto, nosotros diseñamos y preparamos liposomas pH-sensibles conteniendo el compuesto hidrosoluble de bajo peso molecular, con actividad tripanocida etanidazol (ETZ), en su espacio acuoso interno. Nuestra estrategia se basó en emplear el cambio de fase de la membrana, gatillado por el descenso de pH de los endosomas/lisosomas, para conseguir la subsiguiente liberación del ETZ al citoplasma celular. Así, el ETZ se incorporó en el espacio acuoso interno de  vesiculas unilamelares grandes (LUV) pH-sensibles (dioleoil-fosfatidiletanolamina:colesterilhemisuccinato, 6:4, mol:mol) por extrusión a través de membranas de policarbonato de 200 nm y 5 ciclos de congelación/descongelación; el ETZ no incorporado a liposomas se separó por cromatografìa de exclusión molecular. Los LUV-ETZ obtenidos resultaron tener un diámetro de  379 ± 58 nm.  La concentración de la suspensión liposomal fue de 0,51 mg/ml, determinada por HPLC, a una relación droga/lípidos totales de 14% p/p. Utilizando el par fluoróforo/quencher HPTS/DPX, se estudió la endocitosis y ruta intracelular de estos liposomas pH-sensibles empleando microscopía de fluorescencia; asimismo, determinamos actividad anti-amastigote (aa) in vitro sobre células J774 a partir de la medición de la actividad antiamastigote, aa = [número de amastigotes /100 células (con tratamiento/sin tratamiento)]. Los resultados demostraron la liberación efectiva del contenido acuoso liposomal al citoplasma tanto de macrófagos murinos en cultivo (J774) no infectados,  como a infectados con amastigotes de Trypanosoma cruzi (cepa RA); asimismo, hallamos una aa de 77 % luego de 2 h de contacto LUV-ETZ -células, mientras que los tratamientos con liposomas vacíos o  la mezcla de ETZ más liposomas vacíos sólo generaron un porcentaje muy bajo de aa, entre 0 y 5,5 %. Teniendo en cuenta sus características farmacocinéticas, in vivo no es posible obtener una concentración de ETZ tan elevada como la empleada in vitro; por lo tanto, estos resultados ubican a  los LUV-ETZ como vehículos capaces de liberar cantidades masivas de fármacos al interior de células infectadas.