Localización subcelular del antiporter NHX1 de Lotus tenuis

AFFINITO, AGOSTINA; ESPASANDIN FABIANA DANIELA; DEL VAS, MARIANA; SANSBERRO, PEDRO A.; DIAZ PALEO, ANTONIO

Córdoba

Congreso; XXXII Reunión Argentina y XVI Congreso Latinoamericano de Fisiología Vegetal; 2018

SAFV

Lotus tenuis es una leguminosa forrajera naturalizada en los campos bajos de la Pampa Deprimida Argentina, que posee alta plasticidad y capacidad de sopor¬tar condiciones estresantes. NHX1 es un antiporter Na+/H+ ubicado en el tonoplasto que facilita la compartimentalización de Na+ en las vacuolas, disminuyendo la toxicidad en las células. Con el objeto de estudiar la localización subcelular del antiporter en L. tenuis, la secuencia génica de LtNHX1 fue subclonada en el plásmido binario p*7FWG2 para su fusión al gen reportero de la proteína verde fluorescente (GFP), bajo el control transcripcional del promotor CaMV35S. Se verificó la funcionalidad de la construcción mediante la expresión transitoria por infiltración del vector de transformación Agrobacterium tumefaciens en hojas de Nicotiana benthamiana, y la localización de la proteína de fusión LtNHX1-GFP en el tonoplasto de células epidérmicas utilizando microscopía confocal. Finalmente, se realizó la transformación de L. tenuis con la construcción. Los explantes transformados fueron seleccionados adicionando glufosinato de amonio al medio de cultivo. Posteriormente, se confirmó la presencia del transgen en las plantas resistentes mediante PCR. La obtención de las plantas transgénicas previamente mencionadas permitirá el estudio de la localización subcelular de LtNHX1 en la especie y su expresión en situaciones de salinidad.