Organogénesis directa y regeneración de plantas de Lotus glaber tolerantes a altas concentraciones de sales.

F.D. ESPASANDIN, P.A. SANSBERRO, C.V. LUNA, L.A. MROGINSKI

Corrientes

Jornada; Reunión de Comunicaciones Científicas y Técnicas; 2005

Fac. de Ciencias Agrarias. UNNE

El objetivo de nuestro trabajo fue desarrollar un protocolo que permita la regeneración de plantas selectas de Lotus glaber tolerantes a altas concentraciones de sales para ser posteriormente empleado en la obtención de plantas transgénicas. Se utilizaron Semillas de la variedad INTA-PAMPA fueron previamente desinfectadas y cultivadas en un medio químicamente definido, compuesto por las sales y vitaminas de Murashige y Skoog (3), semisólido (agar 0.65 %) y adicionado con sacarosa. Al cabo de 15 días de cultivo, se extrajeron porciones de hojas que fueron subcultivadas en un medio basal de igual composición, adicionado con diferentes concentraciones y combinaciones de ácido naftalenacético, (ANA), benciladenina (BA), cinetina (CIN) y thidiazuron (TDZ). A fin de inducir rizogénesis, los vástagos resultantes de la etapa de elongación, recibieron un pre-tratamiento consistente en la inmersión de su parte basal en una solución acuosa de ANA durante 2 h y posteriormente fueron cultivados en un medio de cultivo de igual composición sin la adición de fitorreguladores. El pH de los medios fue ajustado a 5,8 con KOH y/o HCl antes de adicionar el agar. Los cultivos fueron incubados en condiciones de luz (116 Hmol?m-2?s-1 PPFD, 14 h de fotoperíodo) y temperatura controlada (27±2 °C). Se cultivaron 10 explantes por tratamiento, realizándose 3 repeticiones. Transcurridos 45 días de cultivo, prácticamente en todos los medios ensayados se formaron vástagos, lográndose los mejores resultados cuando se cultivaron trozos de lámina foliar en medios de cultivo suplementados con ANA y BAP, en donde 40.118.3% de los explantes cultivados brindaron 19.73.3 brotes adventicios (Fig.1). La adición simultánea de dos citocininas al medio de cultivo (BA+CIN, TDZ+CIN ó BA+TDZ) redujo considerablemente tanto la tasa de regeneración como el número promedio de yemas neoformadas por explante. Asimismo, más del 80 % de los brotes resultantes de la etapa de elongación enraizaron a través de un sistema de rizogénesis directa sin formación de callos; posibilitando a su vez, una rustificación exitosa, manifestando un fenotipo normal. Los resultados de este trabajo, muestran que es factible regenerar plantas de Lotus glaber mediante el cultivo de trozos de lámina foliar extraídos de plántulas provenientes de la germinación in vitro de semillas. Para ello, las semillas deberán ser sembradas en el medio basal descripto en materiales y métodos. Posteriormente, trozos de lámina foliar procedentes de la brotación in vitro de dichos explantes, serán cultivados en un medio de igual composición, adicionado con ANA y BA. Los brotes obtenidos serán sometidos a un pretratamiento hormonal, a fin de inducir rizogénesis, y seguidamente serán subcultivados a medios frescos y sin reguladores del crecimiento. Finalmente, las plantas resultantes serán transplantadas en suelo estéril y bajo condiciones de alta humedad relativa, la que disminuirá en forma paulatina a fin de lograr su rustificación