´´Obtención de plantas transgénicas de Lotus glaber portadoras del gen codificante de arginina descarboxilasa´´

FABIANA D. ESPASANDÍN, PEDRO A. SANSBERRO, MÓNICA M. COLLAVINO, OSCAR A. RUIZ, LUIS A.MROGINSKI

Chascomus. Buenos Aires.

Congreso; XXVI Reunión de la Asociación Argentina de Fisiología Vegetal.; 2006

Asociacion de fisiologia vegetal

Con el propósito de lograr un sistema que permita la transformación genética y obtención masiva de plantas transgénicas de Lotus glaber fragmentos foliares extraídos de plántulas obtenidas por la germinación in vitro de semillas de una población mejorada por selección recurrente (INTA-PAMPA), fueron transformados mediante infección con el vector binario pBiRD29A-ADC de Agrobacterium tumefaciens, portador del gen de la arginina descarboxilasa de avena, bajo el control del promotor inducible RD29A; conteniendo además como marcador selectivo, el gen codificante de neomicina fosfotransferasa. A tal fin, los segmentos foliares fueron inoculados con una suspensión de A. tumefaciens y co-cultivados a 28ºC en el medio de regeneración (MS + ANA y BA) durante 3 días en oscuridad. Seguidamente, los explantes transformados fueron seleccionados adicionándose al medio de cultivo kanamicina (30 μg/ml) y cefotaxina (400 μg/ml) e incubados en luz (fotoperíodo 14 hs. 27± 2ºC. Cada 3 semanas, los explantes fueron subcultivados a medios selectivos frescos a fin de mantener la presión de selección y evitar la proliferación bacteriana. Transcurridos 45 días de cultivo, los brotes neoformados fueron transferidos a las fases de elongación (MS), enraizamiento (MS + IBA) y rustificación. Las plantas resistentes a kanamicina fueron analizadas mediante amplificación (PCR) utilizando oligonucleótidos específicos para el gen nptII. Posteriormente, segmentos uninodales extraídos de las plantas genéticamente modificadas fueron cultivados en un medio de multiplicación (MS + BA), lográndose el escalado de la producción, manteniéndose estable la presencia del transgen en las plantas clonadas. En conclusión, este procedimiento permite la transformación genética, obtención y micropropagación de plantas transgénicas de Lotus glaber portadoras del gen codificante de arginina descarboxilasa.