Identificación de metabolitos por HPLC para la elaboración de un indicador temprano de la enfermedad de la madera de la vid

MELISA BELÉN ROSA MANZANO; GUADALUPE REVERENDO; EUGENIA GARCÍA; NATALIA HIDALGO; MYRIAM GIMENEZ; MATÍAS FUNES; JOSÉ SEBASTIÁN DAMBOLENA

Congreso; XII Congreso Argentino de Química Analítica; 2023

Se utiliza la denominación “Enfermedades de la Madera de la Vid” (EMV) o “Decaimiento de la Vid” para agrupar a enfermedades tales como Eutipiosis, Esca , Enfermedad de Petri, Black Dead Arm, Diplodia Cane Dieback, Black Foot, Hoja de Malvón. En las mismas se encuentra implicada más de una especie fúngica . Estos hongos producen en las plantas patologías que generan necrosis de madera, decaimiento progresivo y muerte de plantas. Las EMV son causadas por hongos endófitos que invaden el xilema y, por sus características ligninolíticas, hidrolizan y destruyen el tejido vascular de la planta . Como respuesta ante una infección, las plantas activan mecanismos de defensa. Uno de esos mecanismos se encuentra relacionado con la biosíntesis de metabolitos secundarios implicados en los procesos infecciosos, moléculas denominadas Fitoalexinas. Las fitoalexinas son metabolitos secundarios de naturaleza química diversa, principalmente flavonoides, flavonas y fenoles de bajo peso molecular, que se sintetizan en los vegetales después de una infección microbiana. En el desarrollo de este trabajo se tomó como criterio de clasificación la gravedad de las sintomatologías (grado de severidad) que presentaban las plantas. En canopia 1 (C1) la enfermedad comienza a manifestarse en uno de los brazos de la planta. A medida que la enfermedad progresa, se extiende a otros brazos, la planta se vuelve totalmente improductiva (canopia 5 (C5)) y finalmente se seca y muere. Se describe a las canopias 2 a 4 a los grados intermedios. Inicialmente, se extrajo material foliar de 5 plantas con síntomas de la EMV en C1, de 5 plantas en C2-4, 5 plantas en C5 y 5 plantas sin síntomas de un cuadro de 1 Ha de extensión de la variedad Imperial Seedles de plantaciones que se encuentran ubicadas en Vidart y 11 (Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria San Juan-INTA). El material foliar se liofilizó y se colocó en recipientes con 100 mL con metanol como solvente extractante durante 48 hs. Cada muestra se filtró y acidificó con ácido clorhídrico al 1% hasta obtener un pH 2. Se hicieron extracciones con cloroformo, acetato de etilo y diclorometano; 6, 4 y 4 veces respectivamente. Este procedimiento fue extraído de la sección Methodos of Extraction and Isolation de Phytochemical Methods. Se analizaron las fracciones orgánicas utilizando un cromatógrafo líquido de alta performance HPLC acoplado a un detector de arreglo de diodos. Se trabajó con gradiente acetonitrilo-agua, partiendo de porcentaje de agua de 100 % hasta 50 %. La separación cromatográfica se realizó en una columna C18 de fase reversa. El volumen de inyección para todas las muestras es de 20 μL y el flujo de 1 ml / min. La detección se realizó a 310 nm y a 360 nm. Del análisis de los cromatogramas se desprende que se repite un patrón en plantas sanas que desaparece en plantas enfermas, esto es; a TR entre 11,5 min. y 13, 9 min. aparece un pico (compuesto) cuya λmax es 310 nm. (Se estima que es resveratrol), asimismo a TR entre 16 min. y 18 min. aparece un pico cuya λmax es 360 nm (Se estima que es Quercetina). Ambas estimaciones basadas en información bibliográfica y actualmente en vías de confirmación cromatográfica. De los datos obtenidos de este análisis podemos inferir que la desaparición de compuestos del perfil de metabolitos de la planta en las primeras canopias tempranas, resulta en un marcador temprano de la enfermedad de hoja de malvón.