Estudio de la cinética y del comportamiento del biofilm mixto entre levaduras y streptococcus equi subsp. Zooepidemicus, aisladas de equinos.

ETCHECOPAZ ALEJANDRO; IOVANNITTI CRISTINA; GUIDA NORA

Buenos Aires

Jornada; VII JORNADAS DE JÓVENES INVESTIGADORES; 2017

Facultad de Ciencias Veterinarias de la UBA

Las infecciones del útero en yeguas nopreñadas se han hecho más frecuentes conel empleo extendido de antibióticos y lamanipulación de la reproducción intensiva.La bacteria aislada con mayor frecuenciade endometritis, Streptococcus equi subsp.zooepidemicus, puede ser habitante residentede la mucosa vaginal y nasofaríngea equinay se comporta como patógeno oportunistaen el mismo. De igual forma, pero conmenor frecuencia, las levaduras residentesen las mucosas del equino pueden generarinfecciones oportunistas. La interacción entremicroorganismos dentro de la formación debiofilm podría ser un factor determinante enla patogenia de estas infecciones. El objetivode este trabajo fue desarrollar biofilm in vitrode levaduras aisladas de mucosas de equinos,cuantificarlo y estudiar su cinética de desarrollo.Se trabajó con 29 aislamientos y la cepa dereferencia Candida albicans ATCC 66393. En4 microplacas de 96 pocillos de poliestireno defondo plano estériles, se inocularon 200 μl deinóculo a una concentración equivalente al 1 deMc Farland y se incubaron a 37° C en atmósferaenriquecida en CO2. Se realizaron mediciones alas 2, 24, 48 y 72 horas. Se estimó la producciónde biofilm a través de colorimetría y a través delrecuento de unidades formadoras de colonia(UFC). Para estimación por colorimetría, encada tiempo de medición, se lavaron los pocillos3 veces con solución Buffer fosfato pH 7 (PBS) yse agregó 200 μl de Cristal Violeta al 1% a cadapocillo. Luego de incubación por 15 minutos atemperatura ambiente y en oscuridad, se lavaronlos pocillos 3 veces con PBS estéril para removerel exceso de colorante y se realizó la elucióndel colorante adherido a las células agregando200 μl de etanol 96%. La densidad ópticadel sobrenadante se midió a 570 nm. Para laestimación por recuento de UFC, luego de loslavados correspondientes se agregaron 200 μl dePBS estéril, se raspó cada pocillo con raspadoresestériles, se hicieron diluciones en base 10 y sesembraron 10 μl de cada dilución por la técnicade drop test. Se han demostrado diferentescomportamientos en el desarrollo de biofilmy esto estaría relacionado con la capacidad deadherirse y persistir en la mucosa del hospedador.Estudios posteriores permitirán profundizar másen el comportamiento del biofilm de levadurasy en su interacción con Streptococcus equi subsp.zooepidemicus que cohabitan las mucosas delequino.