Estudio de la cinética y del comportamiento del biofilm mixto de Streptococcus equi subsp. zooepidemicus y levaduras aisladas de equinos en presencia y ausencia de antimicrobianos

ETCHECOPAZ ALEJANDRO; BUSTOS CARLA; MESPLET MARIA; IOVANNITTI CRISTINA; GUIDA NORA

Buenos Aires

Jornada; VIII Jornadas de Jóvenes Investigadores.; 2018

Facultad de Ciencias Veterinarias de la UBA

ESTUDIO DE LA CINÉTICA Y DEL COMPORTAMIENTO DEL BIOFILM MIXTO DE STREPTOCOCCUS EQUI SUBSP. ZOOEPIDEMICUS Y LEVADURAS AISLADAS DE EQUINOS EN PRESENCIA Y AUSENCIA DE ANTIMICROBIANOS.Etchecopaz A.N.1; Bustos C.P1; Mesplet M, 1; Iovannitti C.A.2; Guida N.11Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Enfermedades Infecciosas. 2Universidad de Buenos Aires. Facultad de Medicina. Centro de Micología. Buenos Aires, Argentina.El estudio del desarrollo de los biofilm microbianos está adquiriendo especial importancia en los últimos años, frente a los nuevos desafíos de enfermedades crónicas, enfermedades recidivantes y resistencia antibiótica. En equinos, una de las enfermedades de altas consecuencias económicas, que tiende a la cronicidad y a las recidivas es la endometritis en yeguas. El agente aislado con mayor frecuencia de este proceso es Streptococcus equi subsp. zooepidemicus, bacteria que es habitante normal de las mucosas respiratorias y reproductivas de los equinos. El desarrollo en biofilm podría ser el responsable de la permanencia de S equi subsp. zooepidemicus en mucosas y de su progresión como patógeno oportunista ante cambios en su microambiente. En las mucosas, S equi subsp. zooepidemicus convive con levaduras de distintos géneros. En estudios anteriores hemos desarrollado biofilm de levaduras ay de S equi subsp. zooepidemicus, aislados de mucosas nasofaríngea y genital de yeguas, de manera individual. Nos planteamos en este trabajo analizar la cinética y el comportamiento del biofilm mixto de levaduras y de S equi subsp zooepidemicus en ausencia y presencia de antimicrobianos. Se trabajó con 3 cepas de S equi subsp. zooepidemicus y 3 levaduras aisladas de equinos sanos, Candida (C) albicans, C glabrata y Rhodotorula sp. Se desarrolló biofilm en microplaca de 96 pocillos midiéndose la producción a las 24, 48 y 72 horas. Para evaluar el comportamiento en presencia de antimicrobianos se desarrolló biofilm y a las 24, 48 y 72 horas se realizaron 3 lavados con agua destilada estéril y se agregó penicilina G a una concentración de 1 µg/mL (concentración 10 veces mayor a la concentración bactericida mínima (CBM), testeada previamente) preparada en medio de cultivo. Se volvió a incubar por 24 horas y luego se lavaron los pocillos en 3 ocasiones y se colorearon con Cristal Violeta 1% por 15 minutos. Se realizaron nuevamente 3 lavados y se solubilizó el colorante adherido al µcon alcohol 96°. Se midió la absorbancia del colorante a 570nm en espectrofotómetro. Se obtuvo biofilm mixto en todos los casos. Se observó una disminución en la producción de biofilm de S equi subsp. zooepidemicus al interactuar con C albicans, sin variación con las otras levaduras. En algunas cepas se observaron diferencias entre los distintos tiempos de evaluación, demostrando una cinética de producción diferente. Se evidenció una inhibición en la producción de biofilm en presencia de penicilina en todos los casos, que se potenció en el caso de interacción de S equi subsp. zooepidemicus con C albicans. En todas las observaciones, se observó crecimiento bacteriano a partir de los biofilm tratados con penicilina. S equi subsp. zooepidemicus es capaz de interactuar con distintas levaduras dentro de la formación de un biofilm mixto. Existe variabilidad en el comportamiento del biofilm mixto de acuerdo a las cepas involucradas en su formación. El tratamiento con penicilina inhibe el desarrollo del biofilm pero no lo elimina, persistiendo bacterias viables aun a concentraciones de antibiótico 10 veces mayores a la CBM. El desarrollo se ve afectado en mayor medida cuando los aislamientos de S equi subsp. zooepidemicus interactúan con C albicans. La comprensión de los biofilm y de las interacciones microbianas permitirá generar estrategias de prevención y tratamiento en enfermedades crónicas o recidivantes para ayudar a combatir la resistencia antibiótica.