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En todas las mucosas, existe una microbiota residente como consecuencia de sucesiones ecológicas que seleccionaron las especies mas adaptadas al sitio. La comunidad de bacterias y hongos es dinámica y diversa, y puede modificarse ante la perturbación ambiental generando interacciones beneficiosas o perjudiciales para el hospedador1. Las interacciones entre hongos y bacterias afectan la supervivencia, colonización y patogénesis de estos microorganismos. Los biofilms hongo-bacteria otorgan propiedades que las diferencian de sus comportamientos individuales2. Los efectos cooperativos observados en infecciones ocasionadas por eucariotas y procariotas podrían ser debidos a la formación de biofilms, ya que las dos consecuencias clínicas del crecimiento en biofilm son la marcada resistencia a agentes antimicrobianos y la protección ante las defensas del hospedador, lo que los hace refractarios al tratamiento convencional2. Dentro del grupo C de Lancefield se encuentra el Streptococcus equi, de gran importancia en caballos. El Streptococcus equi subsp. zooepidemicus (Sez) es comensal de las mucosas nasofaríngea y genital equina y se comporta como patógeno oportunista. Las endometritis en yeguas no preñadas se han hecho más frecuentes con el empleo extendido de antibióticos y las maniobras zootécnicas en la reproducción intensiva. La bacteria aislada con frecuencia de esta patología, Sez, puede ser habitante residente de la mucosa vaginal. Por otra parte, varias especies de Cándida (C) a menudo son aisladas de vagina y endometrio, pero sus relaciones exactas con la enfermedad clínica uterina son confusas pues su recuperación en cultivo suele ser más frecuente que su participación en la etiología de la enfermedad vaginal o uterina. En investigaciones anteriores demostramos la presencia de Sez y Cándida albicans (Ca) en mucosa vaginal de equinos clínicamente sanos como parte de la microbiota3. La capacidad productora de biofilm en Streptococcus pneumoniae ya fue estudiada por Oggionni4 mediante diferentes técnicas y se hallaron numerosos estudios de formación de biofilm en Ca1,2. El Objetivo del estudio fue estandarizar las técnicas para determinar la producción de biofilm in vitro de Ca y Sez juntos y por separado. Se utilizaron idénticas condiciones de siembra e incubación para Ca y Sez. Se trabajó con 1 aislamiento de Ca (UBA575) y 2 de Sez (UBA7501, UBA47b22) de vagina de yeguas y las cepas de referencia Ca ATCC®66396 y Sez ATCC®700400. Método cualitativo en portaobjetos: se cultivaron los microorganismos (mo) en Caldo Tripteína Soja (Britania®) con 5% suero equino (Suermer,Internegocios S.A) y 5% de glucosa por 18hs a 37°C para obtener una suspensión de 5×106 mo/ml. Se colocaron 150 µl de suspensión de Ca y de Sez juntos y 300 µl por separado en portaobjetos nuevos y estériles incubando por 18hs a 37ºC. Se lavaron, se colorearon con una solución de alcian blue (Biopack®) al 2% y se observaron al microscopio óptico. Método cuantitativo en microplaca: luego de repicar las cepas y obtener una suspensión con concentración equivalente a 5 x 106 mo/ml como en el método anterior, se colocaron 100 µl de cada suspensión de Ca y Sez y 200 µl por separado en placas de 96 pocillos de poliestireno de fondo plano nuevas y estériles (Nunc®MaxiSorp). Después de incubar por 18hs a 37ºC, se procedió a volcar el contenido y lavar. Se colorearon con una solución de violeta de genciana (Britania®) al 1% y se lavaron. Se colocaron 200 µl de alcohol etílico en cada pocillo y se leyó la Densidad Optica a 570nm (DO570). En el método cuantitativo se observó la producción de biofilm de las levaduras y los estreptococos por separado y hubo un incremento de la producción de biofilm de todas las cepas de Sez al incubarlas con las cepas de Ca, siendo la formación entre un 15,62% y un 143% mayor juntas que separadas. Por el método cualitativo, se comprobó la presencia de polisacárido rodeando a los mo, siendo mayor la producción de pseudomicelios de las Ca solas que incubadas con Sez. Se demostró la formación de biofilm de Sez y Ca aisladas de vagina de yeguas. El biofilm mixto mostró variabilidad según las cepas en ambos métodos comprobando que la presencia de un mo modifica la producción del otro. El estudio del comportamiento entre bacterias y hongos que coexisten dentro de comunidades microbianas en mucosas de equinos, formando biofilms, ayudarán a tratar con eficacia infecciones oportunistas polimicrobianas.

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