B7- NUEVOS HALLAZGOS EN EL DIAGNÓSTICO DE LA ADENITIS EQUINA Y LA DETECCIÓN DE PORTADORES

BUSTOS CARLA; MUÑOZ ALEJANDRA; ETCHECOPAZ ALEJANDRO; MARTINEZ VIVOT MARCELA; MESPLET MARIA

Rio Cuarto, Cordoba

Congreso; XXII REUNIÓN CIENTÍFICO TÉCNICA DE LA ASOCIACIÓN ARGENTINA DE VETERINARIOS DE LABORATORIOS DE DIAGNÓSTICO; 2018

Asociación Argentina de Veterinarios de Laboratorio Diagnóstico

NUEVOS HALLAZGOS EN EL DIAGNÓSTICO DE LA ADENITIS EQUINA Y LA DETECCIÓNDE PORTADORESC. Bustos1, A. Muñoz1, A. Etchecopaz1, M. Martínez Vivot1, M. Mesplet11Universidad de Buenos Aires, Facultad de Ciencias Veterinarias, Cátedra de Enfermedades InfecciosasIntroducciónLa Adenitis equina es una enfermedad infecciosa producidapor Streptococcus equi subsp. equi (S. equi) que afecta altracto respiratorio superior de equinos principalmentejóvenes. Los signos clínicos incluyen hipertermia,decaimiento, rinitis con descarga nasal serosa amucopurulenta, faringitis y linfoadenitis de cabeza y cuelloque pueden ocasionar disnea y dificultad para deglutir. Enalgunos casos, la bacteria se disemina por vía linfo-hemáticay produce una ?adenitis bastarda? con la consiguienteformación de abscesos en diferentes linfonódulos y órganos.Aproximadamente un 10% de los animales recuperados dela enfermedad pueden permanecer como portadoresasintomáticos portando la bacteria en bolsas guturales ynasofaringe. Estos portadores actúan como fuente deinfección para otros equinos susceptibles, mantienen laenfermedad en un establecimiento y pueden ingresar laenfermedad a establecimientos libres. En consecuencia, ladetección de los portadores de S. equi es un punto clavepara el control de la enfermedad.S. equi es un coco grampositivo, β hemolítico, del grupo Cde Lancefield que posee numerosos factores de virulenciaentre los que se destacan la cápsula, la proteína M (SeM) ysuperantígenos SeeH, SeeI, SeeL y SeeM. Posee un 98%de homología genética con Streptococcus equi subsp.zooepidemicus (S. zooepidemicus) que es un comensal delas mucosas y patógeno oportunista.La adenitis equina se diagnostica con base en los signosclínicos característicos y su presentación frecuentemente enforma de brote y, se confirma con el cultivo bacteriológico oPCR directa a partir de linfonódulos abscedados,nasofaringe o descargas nasales. Los portadores seidentifican mediante cultivo o PCR directa de muestras debolsas guturales y/o nasofaringe. Es importante tener encuenta que el diagnóstico puede dificultarse ante lapresencia de otros comensales de la mucosa como S.zooepidemicus. Habitualmente pueden identificarsemediante su capacidad diferencial de fermentar lactosa,trehalosa y sorbitol y/o amplificación de genescaracterísticos de S. equi como el seM, seeH y seeImediante PCR. Sin embargo, recientemente se handetectado cepas atípicas de S. equi que compartencaracterísticas tanto de S. equi como de S. zooepidemicus,dificultando la identificación final del microorganismo.El objetivo de este trabajo fue reportar los hallazgos decepas atípicas de S. equi locales y describir la rutamicrobiológica para un correcto diagnóstico de adenitisequina y detección de portadores.Materiales y métodosSe trabajó con un total de 23 aislamientos del cepario de laCátedra de Enfermedades Infecciosas que habían sidopreviamente identificados como S. zooepidemicus por superfil de fermentación (lactosa y sorbitol positivos y trehalosanegativos) y la ausencia del gen seeH, que son las pruebasde rutina para el diagnóstico de este agente. Diecinuevecepas habían sido aisladas de nasofaringe de equinosclínicamente sanos y 4 a partir de muestras de equinos consignología de adenitis equina.Se realizó la amplificación de los genes seM y seeIcaracterísticos de S. equi mediante la reacción de PCR. Losproductos de la amplificación del gen seM de 8 cepas fueronpurificados y secuenciados por electroforesis capilar ensecuenciadores automáticos en la Unidad de Genómica delInstituto de Biotecnología CICVyA del INTA Castelar. Luegode la edición y el análisis de las secuencias nucleotídicas, secompararon con aquellas publicadas en GenBank (NationalCenter for Biotechnology Information, NCBI) y sedeterminaron los alelos seM según la base de datosinternacional de MLST (http://pubmlst.org/szooepidemicus/).ResultadosDel total de aislamientos estudiados, 22 fueron negativos algen seeI y 12 positivos al gen seM. Los aislamientospreviamente identificados como S. zooepidemicus fueronclasificados como S. equi atípico cuando amplificaron almenos el gen seM (tablas 1 y 2).S. equi S. zooepidemicus S. equi atípicoLactosa - + +Trehalosa - - -Sorbitol - + +Gen seM + - +Gen seeH + - +/-Gen seeI + - +/-Tabla 1: Criterios de clasificación de las cepas de S. equi, S.zooepidemicus y S. equi atípico.Animales S. equiatípicoS.zooepidemicusClínicamente sanos 8 11 19Enfermos 2 2 410 13 23Tabla 2: Resultados de la detección de cepas atípicas de S. equi.Las secuencias de los productos de PCR del gen seManalizadas correspondieron a alelos previamenteidentificados únicamente en Argentina en cepas típicas de S.equi (SeM 129, 132 y 133).DiscusiónLa Adenitis equina es una enfermedad con una elevadaprevalencia en nuestro país que genera importantespérdidas económicas. Sin dudas, su diagnóstico de certezay la detección de portadores son indispensables para sucontrol integral.En el presente estudio se identificaron 8 cepas atípicas apartir de 7 animales clínicamente sanos que seríanportadores asintomáticos de la enfermedad y, un S. equiatípico a partir de un potrillo que presentó un cuadrorespiratorio con linfoadenopatía submandibular leve deforma aislada.Estas cepas atípicas de S. equi que han perdido genes devirulencia y han adquirido la capacidad de fermentar otrasfuentes de hidratos de carbono podrían considerarseatenuadas y con una mayor capacidad de adaptación quelas cepas típicas. Sin embargo, es interesante destacar queuna de las cepas atípicas se aisló de un equino con uncuadro de adenitis bastarda con signología respiratoria alta yabscesos en diferentes regiones corporales.El hallazgo de estas cepas de S. equi circulando en nuestromedio local, debe ser tenido en cuenta al momento dediagnosticar la adenitis equina y detectar portadoresasintomáticos y así evitar los resultados falsos negativos.Por último, se propone continuar con el estudio de lavirulencia de estas cepas en el equino, así como sucapacidad de colonizar e infectar otras especies animales.Bibliografía-Harris SR, Robinson C, Steward KF, Webb K S, Paillot R, Parkhill J, Holden MT,Waller AS. (2015). Genome specialization and decay of the stranglespathogen, Streptococcus equi, is driven by persistent infection. GenomeResearch, 25(9), 1360?1371.-Libardoni F, Vielmo A, Farias L, Matter L, Pötter L, Spilki F, Vargas A (2013).Diversity of seM in Streptococcus equi subsp. equi isolated from stranglesoutbreaks. Veterinary Microbiology, 162(2): 663-669.-Martins de Moraes C, Silva S, Castagna de Vargas A, Nogueira CE, Leite FP,Gil-Turnes C. (2009). Immunogenicity and cross reactivity indices ofStreptococcus equi subsp. equi strains isolated from cases of Strangles andcommercial vaccines. Ciência Rural, 39(5), 1459-1464.-Waller A, Paillot R, Timoney J (2011). Streptococcus equi: a pathogen restrictedto one host. Journal of medical microbiology, 60(9):1231-1240.- 53 -B8- DETECCIÓN FENOTÍPICA DE RESISTENCIA ANTIMICROBIANA EN Staphylococcus spp.