Aislamiento de transcriptos que presentan expresión diferencial en flores de plantas apomícticas y sexuales de la especie Paspalum notatum

PESSINO, SILVINA C; VALLE, ESTELA M; ORTIZ, JUAN P. A.; MARTÍNEZ, ERIC J.; ESPINOZA, FRANCISCO; QUARIN, CAMILO L.

Rosario, Santa Fe, Argentina

Congreso; XXIX Congreso Argentino de Genética, III Jornada Chileno-Argentina de Genética, XXXII Congreso de Genética de Chile; 1999

Sociedad Argentina de Genética y Sociedad de Genética de Chile

La apomixis es una clonación vía semillas que ocurre naturalmente en angiospermas. Las plantas apomícticas forman un embrión genéticamente idéntico a la madre, sin que haya meiosis ni fecundación. La capacidad de reproducirse por apomixis está determinada genéticamente, y en el caso de algunas gramíneas el carácter parece estar controlado por un locus único. El objetivo de este trabajo fue el aislamiento de RNAms que se expresan diferencialmente en ovarios de plantas apomícticas gametofíticas en el momento en que se produce la supuesta “falla” en la meiosis y la formación del megagametofito no reducido. La técnica utilizada para aislar los transcriptos fue la de exposición diferencial (differential display). Se planteó un sistema experimental del tipo de “RNA mezclado” que disminuye la tasa de falsos positivos que podrían detectarse como consecuencia de la variación genética entre los individuos estudiados. La especie bajo estudio fue Paspalum notatum, una pastura subtropical perenne que se reproduce por apomixis apospórica facultativa a nivel tetraploide. Se cruzaron un padre apomíctico y una madre sexual y el modo de reproducción fue determinado en la progenie F1 por estudios citoembriológicos. Se extrajo RNA total de espículas de 6 individuos seleccionados y hicieron dos mezclas de RNA (una apomíctica y otra sexual). El RNA mezclado se trató con transcriptasa reversa para producir cDNA y luego se generó un perfil de amplificación múltiple semiarbitrario por PCR. En total se utilizaron 4 oligonucleótidos ancla degenerados (5´ T(12)(ACg)A3´, 5´ T(12)(ACg)C3´, 5´ T(12)(ACg)g3´, 5´ T(12)(ACg)T3´) y 21decámeros al azar para generar 50 combinaciones de oligonucleótidos diferentes. Los fragmentos amplificados fueron corridos en electroforesis en geles de poliacrilamida, y se compararon los patrones de amplificación del grupo apomíctico y del grupo sexual. Alrededor de 1500 bandas fueron evaluadas, de las cuales 10 mostraron patrones de expresión claramente contrastantes (4 en el grupo apomíctico y 6 en el sexual). Todos los fragmentos se recuperaron como una banda única del peso molecular esperado (entre 300 y 1000 pb). Los fragmentos correspondientes al grupo de plantas apomícticas fueron clonados usando el PGEM-TEasy Vector System (PROMEGA). Los clones obtenidos están siendo estudiados en análisis de northern blots para confirmar su expresión diferencial.