Microorganismos psicrófilos para la producción de biocatalizadores con potencial biotecnológico en la industria alimenticia

JAVIER DARÍO BRECCIA; GIOVANNI SPAGNA; OSVALDO DELGADO; CARLOS M ABATE; HÉCTOR A. CRISTÓBAL

2003-01-01

2004-01-01

Biológica

Alimentos, bebidas y tabaco-Indust. vinicol

Objetivos y resultados esperados. ·         Aislamiento de microorganismos psicrófilos y/o psicrotolerantes productores de actividades enzimáticas con potencialidad de aplicación en el tratamiento de mostos de frutas y vinos. ·         Identificación molecular y bioquímica de las cepas aisladas y seleccionadas como más promisorias dentro de los procesos mencionados. ·         Identificación, caracterización y purificación de las enzimas involucradas en el proceso.  ·         Ensayo de las actividades enzimáticas sobre sus sustratos naturales y evaluación de los productos resultantes, en cuanto a sus mejoras organolépticas. ·         Clonación y sobre-expresión de los genes responsables de las actividades estudiadas en Escherichia coli. ·         Construcción de una colección de cepas de microorganismos psicrófilos y psicrotolerantes que puedan ser fuente de biocatalizadores en futuros proyectos. Metodología de trabajo Selección de cepas Las cepas se aislaran y seleccionaran empleando técnicas de microbiología tradicional mas otras desarrolladas en nuestro laboratorio (Breccia y col. 1995). Identificación bioquímica y molecular Las cepas seleccionadas serán identificadas por tests bioquímicos tradicionales y por técnicas de microbiología molecular, incluyendo la secuenciación del rDNA 16S y establecimiento de sus relaciones filogeneticas con microorganismos ya descriptos. También serán usados métodos de fingerprint basados en PCR dirigidos hacia los espaciadores de los genes rDNA y tDNA para obtener una mayor caracterización taxonómica de las cepas promisorias (Martinez y col. en prensa). Purificación y caracterización de las enzimas promisorias La enzima o el filtrado del cultivo que muestre los resultados más promisorios serán seleccionados para estudios de purificación y caracterización. En el caso de filtrado de cultivo, la enzima(s) será purificada a homogeneidad y caracterizada por propiedades de actividad y estabilidad (Breccia et al. 1998). El efecto de la enzima pura también será evaluado en comparaciones con extractos crudos y medio de cultivo en las diferentes reacciones realizadas con el objetivo de discriminar la asociación de diferentes enzimas durante el proceso. También se realizara una comparación apropiada de las enzimas aisladas con aquellas obtenidas comercialmente. Metodología de trabajo Selección de cepas Las cepas se aislaran y seleccionaran empleando técnicas de microbiología tradicional mas otras desarrolladas en nuestro laboratorio (Breccia y col. 1995). Identificación bioquímica y molecular Las cepas seleccionadas serán identificadas por tests bioquímicos tradicionales y por técnicas de microbiología molecular, incluyendo la secuenciación del rDNA 16S y establecimiento de sus relaciones filogeneticas con microorganismos ya descriptos. También serán usados métodos de fingerprint basados en PCR dirigidos hacia los espaciadores de los genes rDNA y tDNA para obtener una mayor caracterización taxonómica de las cepas promisorias (Martinez y col. en prensa). Purificación y caracterización de las enzimas promisorias La enzima o el filtrado del cultivo que muestre los resultados más promisorios serán seleccionados para estudios de purificación y caracterización. En el caso de filtrado de cultivo, la enzima(s) será purificada a homogeneidad y caracterizada por propiedades de actividad y estabilidad (Breccia et al. 1998). El efecto de la enzima pura también será evaluado en comparaciones con extractos crudos y medio de cultivo en las diferentes reacciones realizadas con el objetivo de discriminar la asociación de diferentes enzimas durante el proceso. También se realizara una comparación apropiada de las enzimas aisladas con aquellas obtenidas comercialmente.