Actividad Proteolitica y Determinación de la presencia de Plasmidos en Bacterias Psicrofilas y/o Psicrotolerantes asiladas de Organismos Bentonicos Actividad

CRISTÓBAL, H. A.; R.C. AMADIO; C. SERRA BARCELLONA; M.A. MECHOUD; M.J. BOERO; LÓPEZ A. G.; ABATE C. M.

Tafi del Valle, Tucumán, Argentina

Jornada; XXI Reunión Anual de la Asociación de Biología de Tucumán; 2004

Asociación de Biología de Tucumán

Los productos metabólicos de los microorganismos psicrófilos y/o psicrotolerantes poseen un amplio rango de aplicaciones en diversos procesos industriales, agrícolas y medicinales. Los microorganismos psicrófilos han adaptado todos sus componentes celulares al frío para desarrollarse en ambientes a bajas temperaturas. Estas adaptaciones en combinación con la diversidad de microorganismos aislados de ambientes fríos, permite destacar el potencial de una vasta gama de productos biológicos, como así también los diversos procesos que pueden ser explotados por la biotecnología. Las enzimas (catalizadores biológicos de naturaleza proteica) producidas por estos microorganismos presentan gran actividad especifica a bajas y moderadas temperaturas, esta propiedad puede ser extremadamente útil en diversas aplicaciones. El objetivo del presente trabajo fue determinar la presencia de actividades proteolíticas, como así también plásmidos en las colonias aisladas a partir de muestras subantárticas. Las muestras empleadas para el aislamiento de microorganismos corresponden al contenido intestinal de organismos bentónicos (erizo, lapa, centollón y langostilla) obtenidos a partir de diferentes zonas del canal de Beagle. Las muestras fueron enriquecidas en medio leche al 1% a pH 7, y posteriormente incubadas a 20 y 4 ºC con agitación constante. Posteriormente fueron inoculadas en placas con agar leche al 1% y pH 7 e incubadas a temperaturas de 4 ºC en cámara. La determinación del tipo de actividad proteolítica presente en cada colonia aislada se ensayo en placas con agar leche a diferentes pH (4, 7 y 10). Posteriormente se realizaron extracciones de ADN y plásmidos (Técnica de lisis alcalina) de las colonias obtenidas a partir de medio liquido. Se aislaron 64 colonias a partir de las muestras de contenido intestinal de los organismos bentónicos; de las cuales 32 aislamientos desarrollan a una temperatura de 4 ºC mientras que las 32 colonias restantes lo hicieron a 20 ºC. La actividad proteolítica se determinó por la presencia de un halo de clarificación alrededor de las colonias, desarrolladas en medio agar leche, luego de cuatro días de incubación en ambas temperaturas. Los aislamientos que presentaron mayor actividad fueron los incubados a 20º C a pH 7. De 64 colonias aisladas, se realizo extracción de plásmidos. La presencia de los mismos se observó en 10 de las 64 correspondieron a colonias incubadas a 4 ºC. Posteriormente las cepas fueron caracterizadas y agrupadas de cuerdo a los perfiles de restricción (ARDRA) de productos de amplificación del ADNr 16S, obtenidos. Los resultados obtenidos en la determinación de la actividad proteolítica y la presencia de plásmido, son una valiosa herramienta para los estudios de diferentes mecanismos empleados por microorganismos psicrófilos y/o psicrotolerantes en las adaptaciones al frío: como así también la determinación de enzimas-frío activas como catalizadores industriales.