PYCNOPORUS SANGUINEUS: EXPLORANDO LA BIODIVERSIDAD NATIVA DE MISIONES.

MARTINEZ, CN; CASTRILLO, ML; BICH, GA; ZAPATA, PD; VILLALBA, LL

Posadas

Jornada; VII Jornadas de Estudiantes de Bioquimica. Dra Marta Medvedeff; 2017

Introducción:Los hongos de la especie Pycnoporus sanguineus pertenecen al phyllum Basidiomicota. Son especies cosmopolitas y se desarrollan ampliamente en climas tropicales. Macroscópicamente se caracterizan por presentar cuerpos fructíferos adheridos al sustrato por un pequeño estípite, o en forma de repisa de tamaño considerable, con una pigmentación anaranjada o rojiza, lo que permite su fácil distinción a la hora de la recolección.Microscópicamente su característica distintiva es la formación de basidios: estructura donde se originan las basidiosporas; que son la principal forma de reproducción en los basidiomicetes. Su micelio está formado por hifas bien desarrolladas, en su mayoría con fíbulas, septadas, que penetran en el sustrato del que absorben su alimento. La importancia biotecnológica de esta especie radica en la amplia gama de diferentes aplicaciones de los mismos, como ser en el proceso de descomposición de la lignina, en la formación de ectomicorrizas, en ser fuente de metabólitos bioactivos, entre otros.La provincia de Misiones conserva gran parte de la Selva Paranaense, la cual alberga una amplia biodiversidad. Esto ofrece grandes posibilidades para la exploración y descripción de nuevos microorganismos que pueden revelar capacidades innovadoras para posibles aplicaciones biotecnológicas y contribuir con el desarrollo de nuevos productos y procesos claves. Por tal motivo resulta indispensable caracterizar e identificar a los microorganismos de dicha especie, de forma correcta y completa para su mejor aprovechamiento en el campo de la biotecnología.Objetivo:Aislar e identificar tres aislamientos fúngicos con potencial biotecnológico, pertenecientes a la especie Pycnoporus sanguineus, nativos de la provincia de Misiones.Materiales y métodos:Con el fin de obtener aislamientos fúngicos nativos, se recolectaron basidiocarpos con las características macroscópicas peculiares del género Pycnoporus de ecosistemas naturales de la provincia de Misiones. En condiciones de esterilidad, se cortaron pequeñas porciones internas y estériles de los diferentes basidiocarpos y se desinfectaron mediante una batería de desinfección. Posteriormente, las pequeñas porciones se sembraron en medio sólido agar extracto de malta suplementado con el antibiótico Cloranfenicol 0,5 g/L (p/v) y el antimicótico Benomil 0,1 g/L (p/v), e incubadas durante 5?7 días a 29 ± 1°C.Complementariamente, a través de la caracterización microscópica, se detectó la presencia de hifas septadas, basidios, y presencia de fíbulas, estructuras características género Pycnoporus.Posteriormente para completar la identificación de los mismos a nivel de especie, se amplificó y secuenció la región ITS1- 5,8S- ITS2 del ADNr, considerada el código de barra universal para la identificación de especies a nivel molecular. Estas secuencias se analizaron a través de las herramientas de búsqueda de identidad y similitud de la base de datos del National Center forBiotechnology Information(NCBI), y la base de datos Fungal barcoding. Finalmente, se llevó a cabo el análisis bioinformático a través de la construcción de un árbol por el método de Neighbour joining.Resultados:Durante la recolección de los basidiocarpos se seleccionaron aquellos que no presentaron una estructura deteriorada, envejecida o con presencia de ataques por otros organismos ya que esas características podrían interferir a la hora de su identificación y posterior conservación. Este procedimiento permitió caracterizar taxonómicamente hasta nivel de género los tres aislamientos obtenidos (codificados como A6, A8 y P21).Mediante la utilización de una metodología de desinfección adecuada y una correcta visualización microscópica fue posible la corroboración de la pertenencia de los aislamientos obtenidos al género Pycnoporus.Con el fin de complementar la caracterización macro-micromorfológica de los aislamientos obtenidos, se utilizó la comparación de secuencias de la región ITS1-5,8S-ITS2 del ADNr de cada uno éstos, con aquellas depositadas en las bases de datos. Las secuencias fueron editadas y se generó un contigo consenso para cada una de ellas. La identidad de las mismas, fue confirmada utilizando el motor de búsqueda de identidad y similitud de las bases de datos NCBI y Fungal Barcoding.Los resultados para los aislamientos A6, A8 y P21 mostraron índices de identidad máxima del 99,78%, 99,54% y 96,40% con Pycnoporus sanguineus respectivamente (JX082366; FJ234203 y FJ234195 respectivamente). Para representar el análisis bioinformático de los aislamientos obtenidos bajo un mismo árbol de distancia genética, las secuencias obtenidas se alinearon con aquellas de mayor similitud, y con otros géneros y especies pertenecientes al mismo phyllum. Como resultado se obtuvo que los aislamientos A6, A8 y P21 formaron un clado monofilético junto a P. sanguineus (KP012695.1; FJ234184.1; KP012989.1; FJ234203.1; JF792519.1; JN645089.1) con valores de Bootstrap mayor a 90 para el método de Neighbour joining.Conclusión:La identificación por análisis de distancia de cada secuencia nucleotídica, permitió complementar la información otorgada por la caracterización macro-micro morfológica. Se logró identificar de forma correcta y completa a los tres aislamientos con potencial biotecnológico pertenecientes a la especie Pycnoporus sanguineus nativos de Misiones.