ANÁLISIS DE LA DIVERSIDAD GENÉTICA EN SECUENCIAS ITS-RFLP DE HONGOS ENTOMOPATÓGENOS DE LA ESPECIE Beauveria bassiana

SILVA, MRV; BICH, GA; CASTRILLO, ML; ZAPATA, PD; VILLALBA, LL

Posadas

Jornada; VII Jornadas de Estudiantes de Bioquímica. Dra Martha Medvedeff; 2017

INTRODUCCIÓN En la actualidad, la tendencia mundial para el control de plagas y enfermedades que afectan los diferentes cultivos se basa en la utilización de estrategias de manejo integrado, en donde se destaca el control biológico. Particularmente, los hongos entomopatógenos de la especie Beauveria bassiana son un prometedor agente de control biológico de varios insectos plaga de gran importancia económica en la agricultura. La identificación morfológica tradicional en ocasiones puede tornarse difícil, motivo por el cual se suele recurrir al empleo de técnicas moleculares para identificar y complementar los estudios morfológicos. Los marcadores genéticos como el polimorfismo de la longitud del fragmento de restricción de la PCR (PCR-RFLP) y los análisis de secuencias son herramientas de investigación, para identificar o diferenciar cepas de B. bassiana. El método PCR-RFLP in silico permite determinar distintos grados de variabilidad entre las secuencias nucleotídicas mediante la digestión con enzimas de restricción. OBJETIVO El objetivo del presente trabajo fue evaluar bioinformáticamente la aplicación de enzimas de restricción para el análisis de la diversidad genética en secuencias ITS de hongos entomopatógenos de la especie Beauveria bassiana. METODOLOGÍA Se seleccionaron secuencias de la región ITS (ITS1-5,8S?ITS2) de la especie B. bassiana de la base de datos del National Center for Biotechnology Information (NCBI). Los números de acceso de estas secuencias fueron: JX421709 (España), EU086433 (Grecia), EF556209 (China) y AY531996 (Brasil). Además, se evaluaron secuencias de ITS de B. bassiana obtenidas en el laboratorio codificadas como HEP1, HEP 3 y HEP13 (Misiones-Argentina). Todas estas secuencias fueron alineadas y editadas, y se obtuvieron secuencias de aproximadamente 410 pb. Estas secuencias se digirieron in silico con las enzimas de restricción Alu I, EcoR II, Not I y HhA I. Para visualizar los fragmentos generados a partir de las mismas, se realizó una corrida electroforética para cada enzima. Se efectuó el procesamiento y análisis bioinformático de las secuencias con el programa Geneious 9.1.5. RESULTADOS La corrida electroforética in silico de las secuencias de B. bassiana permitió visualizar que la enzima de restricción Alu I cortó las secuencias HEP3, HEP13, EU086433, EF556209 y AY531996 generando dos fragmentos de aproximadamente 350 y 60 pb. La enzima EcoR II cortó las secuencias HEP1, HEP3, HEP13, EU086433 y EF556209 generando dos fragmentos de 260 y 150 pb, no detectando sitio de restricción en las secuencias JX421709 y AY531996. La enzima Not I sólo cortó la secuencia JX421709 generando dos fragmentos de 360 pb y 50 pb. Por último la enzima de restricción HhA I cortó seis de las secuencias analizadas en dos fragmentos de 260 y 150 pb. Sin embargo, se observó que esta enzima de restricción cortó la secuencia EF556209 produciendo tres fragmentos de 200, 150 y 60 pb. Las diferencias entre los tamaños de los fragmentos obtenidos in silico por la acción de las enzimas de restricción en las secuencias ITS analizadas, indican distintos grados de variabilidad entre las secuencias ITS de la especie B. bassiana. Finalmente, ninguna de las enzimas de restricción ensayadas de forma única logró determinar suficiente variabilidad genética como para diferenciar todas las secuencias. En base a los resultados obtenidos, el grado de variabilidad genética presente en la región ITS de estas secuencias no es suficientemente elevado como para ser detectado con las enzimas de restricción Alu I, EcoR II, Not I o Hha I, por lo que se podría continuar evaluando otras enzimas de restricción de corte frecuente. CONCLUSIONES A partir de esta evaluación se pudo observar que las secuencias nucleotídicas de la región ITS pueden ser digeridas con enzimas de restricción y analizadas bioinformáticamente, lo que permite evaluar la variabilidad genética de la especie B. bassiana de forma relativamente práctica y rápida.