"OPTIMIZACIÓN DE SECRECIÓN DE CELULASAS EN AISLAMIENTOS DE TRICHODERMA APLICABLES EN LA ETAPA DE SACARIFICACIÓN".

CASTRILLO, ML

Posadas

Mesa redonda; IX Jornadas Científico Tecnológicas de la Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales de la Universidad Nacional de Misiones.; 2015

La bioconversión de biomasa lignocelulósica en azúcares monoméricos, mediante la acción de enzimas celulasas, es la etapa más lenta y costosa del proceso de obtención de biocombustibles de 2da generación, y se convierte en la principal dificultad económica que obstaculiza el aprovechamiento rentable de esta abundante fuente de energía. Misiones es una región muy biodiversa y favorable para la búsqueda de nuevos microorganismos fúngicos. El género Trichoderma, es uno de los mejores secretores de celulasas. Aislar y caracterizar nuevos aislados microbianos nativos capaces de secretar celulasas con alto rendimiento, aportarían soluciones innovadoras para la aplicación de esta tecnología. El objetivo general fue caracterizar bioquímicamente nuevos sistemas enzimáticos hidrolíticos a partir de aislamientos de Trichoderma, nativos de la provincia de Misiones, seleccionados en base a su óptima capacidad de secreción de celulasas para su aplicación en la etapa de sacarificación.Para evaluar la capacidad secretora de celulasas, se partió de 28 aislamientos de Trichoderma, de los cuales se eligieron los tres aislamientos más promisorios: POS7, NAN13 y TEYU14. Con el fin de optimizar las variables operativas para la secreción de celulasas utilizando sustratos lignocelulósicos en cultivos SSF, se seleccionaron las fuentes de carbono y nitrógeno a través de un análisis de varianza. Para POS7, la mayor actividad enzimática se detectó con bagazo de caña de azúcar, y para NAN13 y TEYU14, con cascarilla de arroz. Respecto a las fuentes de nitrógeno, el mayor incremento en la actividad enzimática se detectó con el complejo nitrogenado Mandels. Una vez seleccionado el medio Mandels, mediante un diseño de superficie de respuesta (RSM), se optimizaron sus tres principales componentes nitrogenados (urea, extracto de levadura y sulfato de amonio), y mediante un nuevo diseño de RSM, se optimizaron diferentes parámetros físico-químicos (relación masa/volumen, % de humedad y pH del medio). Para evaluar la prospección biotecnológica de las enzimas secretadas, se realizaron ensayos de sacarificación enzimática del material lignocelulósico pretratado bajo diferentes condiciones de pretratamiento químico y diversos tiempos de reacción. A partir de una metodología de fermentación adecuada y un diseño experimental eficaz, fue posible optimizar la secreción sinérgica del complejo celulasas y particularmente de cada una de las enzimas del mismo. POS7 presentó la máxima secreción de celulasas (en U/L), seguido de TEYU14 y de NAN13. Respecto a los ensayos de sacarificación, se observó que hubo diferencias significativas entre el control (sin pretratar) y todas las combinaciones de pretratamiento-sacarificación ensayadas.