EVALUACION DEL POTENCIAL ENZIMATICO E IDENTIFICACION MOLECULAR DE CEPAS PERTENECIENTES AL PHYLLUM BASIDIOMICOTA

MARTINEZ, CN; CASTRILLO, ML; FONSECA, MI; ZAPATA, PD; VILLALBA, LL

Posadas

Jornada; IX Jornadas Científico Tecnológicas de la Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales de la Universidad Nacional de Misiones.; 2015

Las enzimas hidroliticas producidas por hongos del phyllum Basidiomicota, hoy día han cobrado gran importancia en diferentes procesos biotecnológicos e industriales. Por lo cual, el desarrollo de tecnologías que permitan caracterizar nuevas cepas fúngicas capaces de secretar celulasas con rendimiento óptimo, podría aportar soluciones innovadoras. Así mismo identificar a estos organismos es unos de los objetivos principales perseguidos en esta rama científica. En la actualidad la identificación correcta y completa de hongos utiliza no solo caracteres morfológicos, sino también herramientas moleculares. Por tanto, nuestro objetivo fue identificar a nivel de especie diferentes cepas del phyllum Basidiomicota y evaluar cualitativamente su potencial enzimático.A partir de 3 cepas (codificadas como A6, A8, P21) se realizaron ensayos cualitativos en placas de Petri conteniendo medio solido compuesto por Mandels, agar 1,7% (p/v) y carboximetilcelulosa (CMC) 0,5% (p/v), como única fuente de carbono. Las cepas se incubaron a 28 ± 1ºC durante 5 días. Posteriormente para detectar su potencial enzimático, se utilizo la técnica del colorante azoico rojo Congo al 0,1%. Se agregó a cada placa la solución del colorante con agitación suave durante 15 minutos, y se detuvo la reacción con repetidos lavados con agua corriente sobre la superficie de la placa, hasta observar la formación del halo de degradación. Este halo se forma debido a la ausencia de CMC, que ha sido desdoblado por la acción del complejo de enzimas hidrolíticas de cada cepa. Partiendo del material genético de las cepas, se logro amplificar y secuenciar la región ITS1-5,8S-ITS2 mediante la utilización de cebadores universales ITS1 e ITS4.Una vez obtenida la región de interés y su secuencia consenso por medio del programa Geneious, se procedió a contrastar la información obtenida con la existente en la base de datos del NCBI (National Center for Biotechnology Information) utilizando la herramienta Blast (Basic Local Alignment Search Tool) y la base de datos Fungal barcoding utilizando la herramienta Pairwise sequence alignment.La evaluación cualitativa del potencial celulolitico permitió observar en las cepas A6 y A8 presencia de secreción enzimática, y en la cepa P21 actividad nula o ausente bajo el límite de detección del método empleado. Mediante el análisis de identidad y similitud y la construcción de clados monofileticos, fue posible identificar a las cepas A6, A8 y P21 como Trametes sanguinea.