INFLUENCIA DEL MEDIO MINERAL SOBRE LA SECRECIÓN DE ENDO-1,4-β-GLUCANASAS POR IRPEX SP. AUTÓCTONO DE MISIONES.

RODRIGUEZ, MD; CASTRILLO, ML; OVIEDO, M; SEDLER, CI; ZAPATA, PD; VILLALBA, LL

Rosario

Congreso; VII Congreso Argentino de Ingeniería Química; 2013

El reemplazo a gran escala de combustibles derivados del petróleo por biocombustibles, tales como el etanol derivado de material lignocelulósico, se presenta como un enfoque novedoso para satisfacer las crecientes demandas energéticas y la reducción de las emisiones de gases de efecto invernadero. La celulosa es el principal componente de la pared celular, el polímero más abundante sobre la tierra y un recurso renovable importante. Para descomponer este material, es necesario disminuir los costos de producción de celulasas y hemicelulasas, e incrementar la productividad volumétrica, usando sustratos baratos y produciendo enzimas con elevada estabilidad. Los hongos de pudrición blanca son organismos con una importante capacidad celulolítica. Éstos producen tres tipos principales de enzimas capaces de hidrolizar la celulosa: endo-1,4-β-glucanasa, celobiohidrolasa y β-glucosidasa. Algunos microorganismos, pueden carecer de celobiohidrolasas, que pueden ser sustituidas por la progresiva producción de endoglucanasas, ya que con ello se logra combinar el mecanismo de acción de ambas enzimas. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la influencia de las sales presentes en el medio mineral sobre la secreción de endo-1,4-β-glucanasas del hongo Irpex sp. autóctono de la provincia de Misiones. Las variables (g/L) y sus respectivos niveles utilizados en el diseño experimental fueron: Mg SO4? 7 H2O (0,1; 0,5), CaCl2? 2 H2O (0,1; 0,5), KH2PO4 (1; 5), Zn SO4? 7 H2O (0; 0,002), CoCl2? 6 H2O (0; 0,004) yFe SO4? 7 H2O (0; 0,05), dejando fijas la fuente de nitrógeno y carbono (harina de pino y eucalipto). Con estas variables se realizó un diseño factorial fraccionado 26-1 con 3 puntos centrales para evaluar la influencia de cada variable y sus interacciones. El hongo se activó en MEA en estufa a 29ºC durante 5 días. Para el preinóculo se prepararon 7 erlenmeyers de 250mL con 50mL de medio. En el preinóculo se utilizó medio Mandels con glucosa como fuente de carbono. Se tomaron 4 tacos de 6mm de diámetro para cada uno de los erlenmeyers, que se incubaron a 29ºC. Los micelios de los 7 erlenmeyers se lavaron con agua destilada estéril y se colocaron en un vaso estéril con buffer acetato de sodio a pH 4,8 0,05M y Tween 80 al 0,1 % para triturarlos con 5 pulsos de 1-2 s (densidad óptica a 600nm 0,768). El cultivo se inoculó con 4 mL del triturado y se incubó a 29ºC y 80 rpm. La actividad endo-1,4-β-glucanasa fue determinada según la técnica de la IUPAC a los 3, 6, 9, 12 y 15 días de cultivo. La actividad máxima se observó al día 6 (13.000 U/mL) y los factores con incidencia significativa fueron KH2PO4, CoCl2 y CaCl2. Por lo tanto, para aumentar la actividad será necesario establecer las concentraciones óptimas de éstas mediante un diseño en superficie de respuesta y mantener todas las variables no significativas en su nivel -1.