INVESTIGADORES
CASTRILLO Maria lorena
congresos y reuniones científicas
Título:
DISEÑO DE CEBADORES DEGENERADOS PARA LA AMPLIFICACIÓN DE ENDOGLUCANASAS EN CEPAS DEL GÉNERO ASPERGILLUS.
Autor/es:
ZINI, PL; CASTRILLO, ML; GONZALEZ, EA; BICH, GA; FONSECA, MI; ZAPATA, PD; VILLALBA, LL
Lugar:
Salta
Reunión:
Congreso; XLI Congreso Argentino de Genética. III Reunión Regional SAG-NOA.; 2013
Resumen:
Las endoglucanasas (EGs) son parte del complejo de enzimas celulolíticas que hidrolizan enlaces beta-1,4-glucosídicos, usando como sustrato la celulosa, siendo ampliamente requeridas en la obtención de bioetanol. Tomamos como modelo biológico hongos del género Aspergillus por varias razones: son fácilmente aislados de muchos sustratos en descomposición, requieren condiciones mínimas de manejo y son normalmente citados como grandes secretores de estas enzimas. Con el fin de amplificar un fragmento del gen que codifica para EGs en cepas del género Aspergillus, diseñamos cebadores degenerados que permitan lograr esto. El diseño fue llevado a cabo mediante la búsqueda de secuencias aminoacídicas correspondientes a EGs registradas en la base de datos del NCBI (National Center of Biotechnology Information), con la ayuda de la herramienta BLASTp (Basic Local Aligment Search Tool for protein). Se seleccionaron 14 secuencias de Aspergillus que presentaron mayor porcentaje de identidad. Se alinearon mediante el programa ClustalW2 y en base a las secuencias consenso encontradas se diseñaron cebadores degenerados, teniendo en cuenta la nomenclatura IUPAC y la hipótesis del tambaleo para reducir su índice de degeneración. La factibilidad de los cebadores se evaluó con el programa FastPCR observando que el porcentaje de GC oscilara entre 40 y 60%, las temperaturas de fusión no se encontraran separadas por más de 5°C y no presentaran formación de dímeros. Estos cebadores serán evaluados en el laboratorio para lograr la amplificación del fragmento de interés de aproximadamente 330pb.