EVALUACIÓN DE LA CAPACIDAD ENZIMÁTICA SECRETORA DE CELULASAS EN CEPAS DE Trichoderma sp. NATIVAS DE MISIONES.

CASTRILLO, ML; AMERIO, NS; BICH, GA; GONZALEZ, EA; FONSECA, MI; ZAPATA, PD; VILLALBA, LL

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología. II Congreso de Microbiología Agrícola y Ambiental.; 2013

La bioconversión de celulosa a etanol a través de enzimas celulóliticas ha surgido como una alternativa potencial para reducir el uso de combustibles fósiles y la polución ambiental. La sacarificación constituye una de las principales etapas en la obtención de bioetanol y necesita del aporte de insumos costosos, como las enzimas responsables de desdoblar la celulosa, para liberar los azucares fermentables. Los hongos pertenecientes al género Trichoderma poseen distribución cosmopolita y plasticidad ecológica, lo que está estrechamente relacionado a su gran capacidad enzimática. Teniendo en cuenta que el aislamiento y caracterización de nuevas cepas fúngicas capaces de secretar celulasas con rendimiento óptimo podría aportar soluciones innovadoras para la etapa de sacarificación, nos propusimos como objetivo de trabajo evaluar cualitativamente la capacidad de producir y secretar celulasas en cepas de Trichoderma sp. nativas de Misiones. A partir de 28 cepas de Trichoderma asiladas de Misiones, se realizaron ensayos cualitativos en placas de Petri conteniendo medio sólido compuesto por Mandels, agar 1,7 % (p/v) y carboximetilcelulosa (CMC) 0,5 % (p/v), como única fuente de carbono. Las cepas se incubaron a 29 ± 1ºC durante 5 días. Para detectar el poder celulolitico de las cepas, luego del periodo de incubación, se agrego a cada placa una solución del colorante azoico rojo Congo al 0,1%, con agitación suave durante 15 minutos, y se detuvo la reacción con repetidos lavados con agua corriente sobre la superficie de la placa hasta observar la formación del halo de degradación, que se torna transparente debido a la ausencia de CMC, que ha sido desdoblado por la acción del complejo celulasas de cada cepa. Fue posible categorizar las cepas de Trichoderma autóctonas en relación a su potencial celulolítico, clasificando las mismas mediante una escala de valores. Las cepas PROF5, PROF7, NAN13, TEYU14, POS3 y POS7 (++++) mostraron cualitativamente mayor actividad enzimática; seguidas de las cepas PROF1, PROF4, PROF6, PROF8, POS6, POS11 y TRICHO4 (+++); y de las cepas; POS8, POS10 y NAN11 (++). Las cepas que presentaron menor actividad enzimática cualitativamente fueron PROF2, PROF3, POS1, POS5, POS9, NAN12, TRICHO1 y TRICHO2 (+); seguidas de las cepas NAN9, TRICHO3, TRICHO5 y POS2 (-). Los ensayos realizados permitieron la detección del potencial oculto e inexplorado hasta el día de hoy en hongos aislados de la selva subtropical de Misiones. Su maquinaria enzimática celulolítica ser aplicable durante la conversión de la biomasa lignocelulósica, representando una estrategia promisoria en la producción de bioetanol y una alternativa interesante en la bioconversión. Las cepas que mostraron mayor secreción de celulasas y, por tanto, potencialmente utilizables en estrategias biotecnológicas fueron PROF5, PROF7, NAN13, TEYU14, POS3 y POS7 (++++), seguidas de las cepas PROF1, PROF4, PROF6, PROF8, POS6, POS11 y TRICHO4 (+++) y de las cepas; POS8, POS10 y NAN11 (++).