Determinación cualitativa de degradación enzimática de cepas de Trichoderma sp nativas de la provincia de Misiones

CASTRILLO, ML; RODRIGUEZ, MD; VILLALBA, LL; ZAPATA, PD

Posadas

Jornada; VIII JORNADAS CIENTIFICO - TECNOLOGICAS; 2011

La celulosa es el principal componente de la pared celular vegetal, el polímero más abundante sobre la tierra y un importante recurso renovable. Varios hongos filamentosos han sido descriptos como organismos que producen altos niveles de celulasas y degradan la madera. El sistema enzimático de las celulasas consiste en 3 clases principales de  enzimas: celobiohidrolasas, endoglucanasas y β-glucosidasa, las cuales actúan sinérgicamente para degradar la celulosa a glucosa. Las enzimas celulasas que han sido más caracterizadas son las producidas por el hongo Trichoderma reesei. Por tanto, nuestro objetivo fue determinar la degradación enzimática producida por cepas nativas de Trichoderma sp. mediante un ensayo cualitativo. Los métodos cualitativos en medio sólido son ampliamente utilizados y apropiados como técnicas de screening. En este trabajo se ensayó el poder celulolítico de 14 cepas de Trichodermasp nativas de suelos no agredidos de la Provincia de Misiones. Todas las cepas se sembraron en agar Czapeck conteniendo 0,1% de carboximetilcelulosa (CMC) y se dejaron crecer a 29ºC por 7 días. Una vez cumplido el tiempo de incubación se detuvo el ensayo agregándole a cada placa una solución del colorante azoico rojo Congo al 0,1%. Se procedió luego a incubar por 1 hora a 50ºC deteniéndose la reacción mediante lavado de la superficie de la placa con agua, hasta observar la formación del halo de degradación. La zona de la placa que se torna transparente corresponde al halo de degradación. Las cepas analizadas mostraron un rápido crecimiento alcanzando el borde de la placa a los 2 o 3 días, aunque el desarrollo del halo de degradación puede observarse recién a los 7 días, siendo más intenso en las zonas de esporulación. A partir de estos resultados se podría sugerir por un lado, que las cepas nativas de Trichoderma sp tendrían metabolismo secundario; y por otro, que el día de incubación óptimo para evaluar la degradación enzimática podría ser cercano a los 7 días de cultivo a 29ºC.